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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Purificação e caracterização parcial de ATPase de larvas de Zabrotes subfasciatus (Coleóptera: Chrysomelidae: Bruchinae) e modulação fitoterápica de sua atividade
metadata.dc.creator: França, Juliana Luzia
metadata.dc.contributor.advisor1: Coelho, Milton Vieira
metadata.dc.contributor.referee1: Hamaguchi, Amélia
metadata.dc.contributor.referee2: Leone, Francisco de Assis
metadata.dc.description.resumo: Zabrotes subfasciatus (Boheman) é a principal praga do feijão comum (Phaselous vulgaris). O objetivo do presente estudo foi a purificação, caracterização e modulação fitoterápica de uma ATPase a partir da fração solúvel de larvas de Z. subfasciatus. As larvas, recém extraídas do feijão, foram homogeneizadas em tampão de extração e centrifugadas a 45.000 g por 30 min a 4ºC. O sobrenadante foi fracionado com sulfato de amônio. A fração precipitada 45-80% de saturação foi homogeneizada em tampão de baixa força iônica e centrifugada, o sobrenadante resultante foi aplicado em coluna de Q-Sepharose. A coluna foi eluída com NaCl 200mM e, posteriormente, com um gradiente de NaCl 200 a 500mM. Após a cromatografia, as frações que expressaram maior atividade Ca2+/Mg2+-ATPase foram reunidas, constituindo a fração ATPase de larvas de Z. subfasciatus. O principal polipeptídio dessa fração apresentou massa molecular relativa um pouco acima da cadeia pesada de miosina II. A fração ATPase apresentou atividade K+/EDTA-ATPase significativa. O PPi e o ADP praticamente não foram hidrolisados,. Tapsigargina, ouabaína e azida não inibiram a atividade Ca2+/Mg2+-ATPase. Extrato aquoso de Eucalyptus citriodora, Chenopodium ambrosioides e Rosmarinus officinalis inibiram a atividade Ca2+/Mg2+-ATPase, sendo que o Eucalyptus citriodora inibiu por completo essa atividade. A caracterização desta fração excluiu a possibilidade da presença de várias ATPases e apresentou um forte indício da presença de miosina, devido a alta atividade K+/EDTA.
Abstract: Zabrotes subfasciatus is the most common pest of the stored beans (Phaselous vulgaris). This study was carried out to characterize ATPase from Z. subfasciatus larvae and to investigate its phytotherapy modulation. Larvae extracted from Phaseolus vulgaris were firstly homogenised in extraction buffer, and then centrifuged 45000g for 30min at 4ºC. Supernatant was fractioned with ammonium sulfate, precipitaded fraction on 45-80% saturation was homogenized in reduction ionic strength buffer, centrifuged and the supernatant was applied in ion exchange chromatography on Q-Sepharose. The column was eluted with 200mM NaCl and after that with salt gradient containing 200 to 500mM NaCl. After chromatography, fractions that presented Ca2+/Mg2+-ATPase activity constituted Z. subfasciatus larvae ATPase fraction. The main polypeptide from this fraction showed relative molecular weight similar of the myosin VII. This fraction presented significant K+/EDTA-ATPase activity. Both pyrophosphate and ADP were not hydrolyzed. Tapsgargin, ouabain and azide did not inhibit Ca2+/Mg2+-ATPase activity. Aqueous extracts from leaves of C. ambrosioides, R. officinalis and E. citriodora inhibited Ca2+/Mg2+-ATPase activity, being the last one more effective. These results strongly indicate the presence of myosin in Z. subfasciatus larvae ATPase fraction, considering that it presented high K+/EDTA activity.
Keywords: ATPase
Zabrotes subfasciatus
Inseticida natural
ATPase
Zabrotes subfasciatus
Botanical insecticide
Enzimas
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: FRANÇA, Juliana Luzia. Purificação e caracterização parcial de ATPase de larvas de Zabrotes subfasciatus (Coleóptera: Chrysomelidae: Bruchinae) e modulação fitoterápica de sua atividade. 2009. 73 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2009.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15819
Issue Date: 16-Apr-2009
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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