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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Identificação de sorotipos de adenovírus em aspirados de nasofaringe de crianças, com doença respiratória aguda, atendidas em Uberlândia, MG
metadata.dc.creator: Luiz, Lysa Nepomuceno
metadata.dc.contributor.advisor1: Nepomuceno, Júlio César
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Queiróz, Divina Aparecida Oliveira
metadata.dc.contributor.referee1: Espindola, Foued Salmen
metadata.dc.contributor.referee2: Leite, José Paulo Gagliardi
metadata.dc.description.resumo: Introdução: Adenovírus (AdVs) constituem importante causa de doença respiratória aguda (DRA), gastroenterites, conjuntivites e infecções urinárias em humanos. Objetivos: Detecção de AdVs por imunofluorescência indireta (IFI) e por reação em cadeia pela polimerase (PCR) em aspirados de nasofaringe de crianças menores de 5 anos de idade, com DRA, atendidas em Uberlândia, MG, assim como, comparação de dois testes de PCR e identificação de sorotipos de AdVs circulantes na região. Material e Métodos: Um total de 468 espécimes clínicos obtidos de novembro de 2000 a abril de 2007 foi testado pela IFI para detecção de AdVs e outros vírus respiratórios. Em seguida, o DNA das 126 amostras in natura que obtiveram resultado negativo /inconclusivo pela IFI e que também foram negativas para rinovírus pela RT-PCR, foi extraído por Trizol® e testado pela PCRAraújo (Araújo et al., 2001) para os AdVs. Os espécimes positivos para AdVs foram inoculados em células HEp-2 e A549. Além disso, o DNA das amostras positivas, tanto in natura quanto do raspado de cultura de células, foi extraído utilizando-se o kit QIAmp DNA Mini Kit (QIAGENTM Valencia, CA) e testado novamente pela PCRAraujo e pela PCRAllard (Allard et al., 2001), afim de comparar a sensibilidade/especificidade dos dois testes. Além disso, os sorotipos foram identificados a partir do seqüenciamento dos nucleotídeos de produtos de PCR positivos para AdVs. Resultados: Das 468 amostras, 33 (7,1%) foram positivas para AdVs, sendo 14 pela IFI e 19 pela PCRAraujo. De 32 espécimes inoculados em cultura de células, foi possível isolar os AdVs de 16. A comparação dos resultados obtidos a partir do DNA das 33 amostras in natura, extraídas por coluna, mostrou que a sensibilidade da PCRAraujo foi ligeiramente superior à da PCRAllard (92,9% and 90,0%, respectivamente). Entretanto, a primeira PCR apresentou uma especificidade consideravelmente menor que a segunda PCR (57,9% and 91,3% respectivamente). O sorotipo AdV2 foi detectado em quase 60,0% (7/12) dos identificados. Conclusões: Os AdVs foram detectados em 7,1% das amostras clínicas de crianças com DRA mediante a combinação de dois métodos, IFI e PCR. A análise da sensibilidade e da especificidade dos dois métodos de PCR empregados, mostrou que a PCRAllard, apresentou sensibilidade ligeiramente inferior à PCRAraujo e especificidade consideravelmente superior. O sorotipo AdV2 foi identificado em 7 das 12 amostras de AdVs seqüenciadas. Palavras-chave: adenovírus, sorotipos, doença respiratória aguda, crianças.
Abstract: Background: Adenoviruses (AdVs) are important cause of acute respiratory disease (ARD), gastroenteritis, conjunctivitis and urinary infections in humans. Objectives: Detection of AdVs by immunofluorescence assay (IFA) and by polymerase chain reaction (PCR) in nasopharyngeal aspirates of children less than 5 years old presenting ARD in Uberlândia, MG, as well as, comparison of two PCR assays and identification of serotypes that circulated in this region. Study Design: A total of 468 clinical specimens was collected from November 2000 to April 2007 and tested by IFA for adenovirus detection and other viruses. After that, the DNA of the 126 in natura negative/inconclusive samples by IFA which were also negative for rhinovirus by RT-PCR, were extracted by Trizol® and tested by PCRAraújo (Araújo et al, 2001) for adenovirus detection. The positive specimens for adenovirus were inoculated into HEp-2 and A-549 continuous cell lineages. In addition, the DNA of either, in natura samples and cell culture-scrapped samples, were extracted by using the QIAmp DNA Mini Kit (QIAGENTM Valencia, CA) and tested again by PCRAraujo and by PCRAllard (Allard et al., 2001) in order to compare the sensitivity/specificity of both tests. In addition, the serotypes were identified from the nucleotide sequencing of PCR products positive for adenovirus. Results: From the 468 samples, 33 (7.1%) were positive for AdVs, 14 by IFA and 19 by PCRAraujo. From the 32 specimens inoculated in cell culture, it was possible to isolate AdVs in 16. The comparison of the results obtained from the DNA of the 33 in natura samples extracted by the QIAmp DNA Mini Kit (QIAGENTM Valencia, CA) showed that the sensibility of PCRAraujo was a little higher than PCRAllard (92.9% and 90.0%, respectively). However, the first PCR presented a lower specificity than the second one (57.9% and 91.3%, respectively). The serotype AdV2 was detected in almost 60.0% (7/12) of those identified. Conclusions: AdVs were detected in 7.1% of the clinical samples in children with ARD throught the combination of two methods, IFA and PCR. The analysis of the sensibility and specificity of the two PCR assays, showed that PCRAllard presented a little lower sensibility than PCRAraujo and higher specificity. The serotype AdV2 was identified in 7 of the 12 AdVs sequenced samples.
Keywords: Adenovírus
Sorotipos
Doença respiratória aguda
Crianças
Adenovirus
Serotypes
Acute respiratory disease
Children
Doença respiratória infantil
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: LUIZ, Lysa Nepomuceno. Identificação de sorotipos de adenovírus em aspirados de nasofaringe de crianças, com doença respiratória aguda, atendidas em Uberlândia, MG. 2008. 47 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15802
Issue Date: 14-Feb-2008
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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