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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Solubilização e efeito de tapsigargina em Ca2+-ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius 1792) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae)
metadata.dc.creator: Duarte, Vinícius Luis
metadata.dc.contributor.advisor1: Coelho, Milton Vieira
metadata.dc.contributor.referee1: Santos, Hérica de Lima
metadata.dc.contributor.referee2: Wink, Márcia Rosângela
metadata.dc.description.resumo: CAPITULO I: Pachymerus nucleorum Fabricius 1792 é uma espécie de besouro predador de castanhas de babaçu (Orbignya sp.) pertencente à subfamília de coleópteros Bruchinae, cujos representantes são conhecidos como broc as de sementes. Uma fração precipitada (P3) obtida a paritr de larva de P. nucleorum e não solubilizada com Triton X100 apresentou atividade Ca2+-ATPásica e K+/EDTA-ATPásica. O presente trabalho teve como objetivo solubilizar a enzima responsável pela ativ idade ATPásica e caracterizá-la. A atividade Ca2+-ATPásica foi parcialmente solubilizada com NaCl 600 mM e a análise em SDS-PAGE mostrou a presença mais marcante de um polipeptídeo com mobilidade relativa de 205 kDa, e mais fracamente um de 130 kDa e um de 102 kDa. NaCl 600 mM inibiu cerca de 40% da atividade de P3, chegando a 84% com NaCl 2M. A atividade Mn2+-ATPásica da fração solubilizada representou cerca de 40% da Ca2+-ATPásica, e não foi detectada atividade Mg2+- ATPásica. Em presença de zinco ou ferro oxidado, a atividade ATPásica foi nula e quando incubada com cobalto, cobre, bário, lítio ou ferro reduzido, a atividade correspondeu a menos de 20% da Ca2+-ATPásica. A atividade Ca2+-ATPásica foi completamente inibida por magnésio, cobre e zinco. Cobalto, manganês, ferro (oxidado e reduzido) inibiram em mais de 60% tal atividade, e bário ou lítio não afetaram a atividade dependente de cálcio. Neste trabalho, a atividade Ca2+- ATPásica de larva de Pachymerus nucleorum foi parcialmente solubilizada com NaCl 600 mM e apresentou atividade Ca2+-ATPásica inibida por magnésio. CAPITULO II: Ca2+-ATPases são ATPases envolvidas no transporte de cálcio através de membranas. As Ca2+-ATPases de retículo sarcoplasmático e endoplasmático são irreversivelmente inibidas por concentrações micromolares de tapsigargina. O objetivo deste trabalho foi testar o efeito de tapsigargina na atividade Ca2+-ATPásica isolada a partir de larva de Pachymerus nucleorum, um besouro pertencente à subfamília Bruchinae. As larvas de P. Nucleorum foram homogeneizadas, e a fração precipitada (fração P3) não solubilizada com Triton X-100 e pirofosfato, foi utilizada para os testes de inibição por tapsigargina. Tapsigargina 140 μM inibiu cerca de 80% e 95% da atividade Ca2+-ATPásica da fração P3, quando adicionada no início ou 5 minutos antes de iniciar reação, respectivamente. Pré-incubação com ATP ou cálcio preveniu parcialmente a inibição da atividade Ca2+-ATPásica por tapsigargina, assim como pré-incubação na presença de ATP e cálcio. Os resultados mostrados neste trabalho sugerem que a ATPase isolada de larva de P. Nucleorum trata-se de uma Ca2+-ATPase.
Abstract: CHAPTER I: Pachymerus nucleorum Fabricius 1792 is a beetle specie that predate babaçu coconut (Orbignya sp.). It belong to Bruchinae coleoptera subfamily, whose representants are know as seed bits. We found a precipitated fraction from larvae of P. nucleorum that is not solubilized by Triton X-100 (P3) and presents Ca2+-ATPase and K+/EDTA-ATPase activity. The objective of this work was solubilize and characterize the enzyme responsible for the Ca2+-ATPase activity. The Ca2+-ATPase was partially solubilized with 600 mM NaCl and the soluble fraction from this assay (S4) was better characterized. We noticed in SDS-PAGE a strongly stained polypeptide with 205 kDa and two others with 130 and 102 kDa. 600 mM NaCl inhibits about 40% of P3 Ca2+-ATPase activity, and 84% with 2 M NaCl. We found in S4 Mn2+-ATPasic activity, corresponding to 40% of the observed with calcium, and no Mg2+-ATPase activity was detected. In presence of Zn2+ or Fe2+ the ATPase activity was null and when incubated with cobalt, copper, barium, litium or Fe 2+, the ATPase activity correspond to less than 20% of the Ca2+-ATPase activity. The Ca2+- ATPase activity was completely inhibited by magnesium, copper ou zinc. Cobalt, manganese, Fe3+ or Fe2+ inhibited in more than 60% such activity, and barium and litium didn t affect the calcium-dependent activity. In this work, the Ca2+-ATPase activity of Pachymerus nucleorum larvae was partially solubilized with 600 mM NaCl and presents Ca2+-ATPase activity inhibited by magnesium. CHAPTER II: Ca2+-ATPases are ATPases involved in transport of calcium across membranes. Sarcoplasmic and endoplasmic Ca2+-ATPases are irreversibly inhibited by thapsigargin in micromolar concentrations. The objective of this work was to test the effect of thapsigargin on Ca2+-ATPase activity isolated from Pachymerus nucleorum larvae, a beetle especie that belongs to Bruchinae coleoptera subfamily. The P. nucleorum larvae were homogeneized and the precipitated fraction (P3 fraction) not solubilized with Triton X-100 was used to thapsigargin inhibtion tests. Thapsigargin 140 μM inhibit about 80% and 90% of Ca2+-ATPase activity of P3, when added in the begin or 5 minutes before the start reaction, respectivelly. Preincubation with ATP or calcium partially prevented the inhibition of Ca2+-ATPase activity. The inhibition was completely prevented with pre-incubation with both ATP e calcium. The results showed in this work suggest that the ATPase isolated from P. Nucleorum larvae treats of a Ca2+-ATPase.
Keywords: Pachymerus nucleorum
Larva
Ca2+-ATPase
Solubilização
Tapsigargina
Larvae
Ca2+-ATPase
Solubilization
Thapsigargin
Enzimas
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: DUARTE, Vinícius Luis. Solubilização e efeito de tapsigargina em Ca2+-ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius 1792) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae). 2007. 47 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2007.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15780
Issue Date: 28-Feb-2007
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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