Publicação: Ação in vitro da neuwiedase sobre a infecção por T. gondii em fibroblastos humanos e na produção de mediadores inflamatórios por células mononucleares do sangue periférico humano
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Orientador
Coorientador
Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues
Resumo
CAPITULO II: A infecção por T. gondii afeta mais de um terço da população mundial,
manifestando-se principalmente em indivíduos imunodeprimidos e na infecção
congênita. Terapias em uso são limitadas pela resistência do parasita e efeitos
adversos. Assim, a busca de novas drogas para o controle dessa infecção é
importante. Neste trabalho, avaliamos os efeitos da neuwiedase, uma
metaloprotease isolada da peçonha da serpente Bothrops pauloensis, sobre a
invasão e proliferação in vitro do T. gondii em fibroblastos humanos. Os
resultados obtidos mostraram que o tratamento realizado sobre células
previamente infectadas ou sobre o parasita antes da infecção, apresentou níveis
de inibição da infecção de 71 % e 61%, respectivamente. Os mecanismos de
ação da neuwiedase precisam ser mais bem investigados, mas a capacidade
dessa enzima em degradar alguns componentes da matriz extracelular, como
laminina, fibronectina e colágeno tipo I pode ser importante na diminuição da
invasão de células hospedeiras pelo T. gondii. CAPITULO III: A liberação de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias (IL-12, TNF-α e IL-8) e da
citocina antiinflamatória (IL-10) por células mononucleares do sangue periférico
humano (PBMC) foi avaliada após estímulo com neuwiedase, uma
metaloprotease Zn2+ dependente isolada da peçonha de Bothrops pauloensis.
Iniicialmente, através do ensaio de metabolização do MTT, verificamos que a
neuwiedase não afetou a viabilidade celular das PBMCs nas diferentes
concentrações testadas (3, 6 e 12 μg/mL) Os sobrenadantes de PBMCs
cultivadas na presença de neuwiedase foram coletados e submetidos ao ensaio
de ELISA sanduíche para quantificação da produção de citocinas e quimiocinas.
Sob estímulo da neuwiedase, as células mononucleares aumentaram de forma
significativa a produção de IL-12p40, IL-8 e TNF-α e não houve alteração na
produção de IL-10 em relação aos controles não estimulados. Esse estudo
confirma o efeito inflamatório da neuwiedase envolvendo a liberação de
mediadores pró-inflamatórios, provavelmente contribuindo para o dano local
severo induzido pelo envenenamento por Bothrops pauloensis. CPITULO III: A liberação de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias (IL-12, TNF-α e IL-8) e da
citocina antiinflamatória (IL-10) por células mononucleares do sangue periférico
humano (PBMC) foi avaliada após estímulo com neuwiedase, uma
metaloprotease Zn2+ dependente isolada da peçonha de Bothrops pauloensis.
Iniicialmente, através do ensaio de metabolização do MTT, verificamos que a
neuwiedase não afetou a viabilidade celular das PBMCs nas diferentes
concentrações testadas (3, 6 e 12 μg/mL) Os sobrenadantes de PBMCs
cultivadas na presença de neuwiedase foram coletados e submetidos ao ensaio
de ELISA sanduíche para quantificação da produção de citocinas e quimiocinas.
Sob estímulo da neuwiedase, as células mononucleares aumentaram de forma
significativa a produção de IL-12p40, IL-8 e TNF-α e não houve alteração na
produção de IL-10 em relação aos controles não estimulados. Esse estudo
confirma o efeito inflamatório da neuwiedase envolvendo a liberação de
mediadores pró-inflamatórios, provavelmente contribuindo para o dano local
severo induzido pelo envenenamento por Bothrops pauloensis.
Abstract
CHAPTER II: The infection for T. gondii affects more than a third of the world population,
affecting mainly imunocompromised individuals. Therapies in use are limited
because of parasite resistance and side effects. Then, the search for new drugs to
control infection is extremly important. The effects of neuwiedase, an isolated
metaloprotease from Bothrops pauloensis venom, on the in vitro invasion and
proliferation of the T. gondii in human fibroblastos.was investigated The treatment
was done on cells previously infected and on the parasite before the infection, and
results showed infection inhibition levels of 71% and 61%, respectively. The
mechanisms involved in neuwiedase action need to be better investigated, but the
capacity of enzyme to degraded some extracelular matrix components such as
laminin, fibronectin and collagen type I can be important in the reduction of host
cells invasion by T. gondii . CHAPTER III: The release of pro-inflammatory cytokines and chemokine (IL-12, TNF-α and IL-8)
and anti-inflammatory cytokine (IL-10) from human peripheral blood mononuclear
cells (PBMC) was evaluated after exposure to neuwiedase, a Zn2+ dependent
metaloprotease isolated from Bothrops pauloensis venom. Initially, using the MTT
metabolization assay, we show that in all concentrations tested (3, 6 e 12 μg/mL),
neuwiedase did not affect PBMCs viability. Suppernatants of PBMC culture in
presence of neuwiedase were collected and cytokine and chemokine levels were
determined by sandwich ELISA. Under neuwiedase stimulation, PBMCs
significantly increased the production of IL-12p40, IL-8 and TNF-α but not IL-10
production compared cells to not stimulated with neuwiedase. This study confirms
the inflammatory properties of neuwiedase involving the liberation of proinflammatory
mediators, probably contributing to the severe local damage induced
by the Bothrops pauloensis venon. CHAPTER III: The release of pro-inflammatory cytokines and chemokine (IL-12, TNF-α and IL-8)
and anti-inflammatory cytokine (IL-10) from human peripheral blood mononuclear
cells (PBMC) was evaluated after exposure to neuwiedase, a Zn2+ dependent
metaloprotease isolated from Bothrops pauloensis venom. Initially, using the MTT
metabolization assay, we show that in all concentrations tested (3, 6 e 12 μg/mL),
neuwiedase did not affect PBMCs viability. Suppernatants of PBMC culture in
presence of neuwiedase were collected and cytokine and chemokine levels were
determined by sandwich ELISA. Under neuwiedase stimulation, PBMCs
significantly increased the production of IL-12p40, IL-8 and TNF-α but not IL-10
production compared cells to not stimulated with neuwiedase. This study confirms
the inflammatory properties of neuwiedase involving the liberation of proinflammatory
mediators, probably contributing to the severe local damage induced
by the Bothrops pauloensis venon.
Palavras-chave
Toxoplasma gondii, Neuwiedase, Toxoplasmose, Toxinas de serpente, Atividade in vitro, Fibroblastos humanos, Citocinas, Quimiocinas, Células mononucleares, Metaloproteases, Toxoplasma gondii, Neuwiedase, Snake venom, Humans fibroblasts, Cytokines, Chemokines, Neuwiedase, Peripheral blood mononuclear cells, Snake venoms, Metalloproteinases, Cobra venenosa - Veneno, Brothrops
Citação
BASTOS, Luciana Machado. Ação in vitro da neuwiedase sobre a infecção por T. gondii em fibroblastos humanos e na produção de mediadores inflamatórios por células mononucleares do sangue periférico humano. 2008. 116 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.