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metadata.dc.type: Tese
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Epítopos miméticos e autoantígenos aplicados ao imunodiagnóstico da artrite reumatoide e artrite idiopática Juvenil oligoarticular e poliarticular
metadata.dc.creator: Araujo, Galber Rodrigues
metadata.dc.contributor.advisor1: Vieira, Carlos Ueira
metadata.dc.contributor.referee1: Silva, Carlos Henrique Martins da
metadata.dc.contributor.referee2: Goulart Filho, Luiz Ricardo
metadata.dc.contributor.referee3: Napimoga, Marcelo Henrique
metadata.dc.contributor.referee4: Franco, Marcelo de
metadata.dc.description.resumo: Introdução: Artrite reumatoide (AR) e artrite idiopática juvenil (AIJ) são doenças reumáticas, de origem autoimune, sem causa conhecida, caracterizadas por inflamação que pode provocar danos articulares e, em alguns casos, danos em outras partes do corpos. Não há, até o momento, um teste único para o diagnóstico da AR e AIJ, que é baseado na história clínica do paciente, e em vários exames laboratoriais e de imagem. Neste contexto, a busca por novos biomarcadores com alta sensibilidade e especificidade para a AR e AIJ é de grande interesse. Objetivos: O foco do presente estudo foi selecionar, caracterizar e validar alvos reconhecidos por anticorpos circulantes e que poderiam ser potencialmente descritos como autoantígenos da AR ou AIJ. Metodologia: A tecnologia de Phage Display foi empregada para selecionar peptídeos ligantes a anticorpos circulantes de camundongos apresentando sinais de artrite após indução com colágeno tipo II (modelo CIA), e anticorpos circulantes de pacientes com AIJ. Análises in silico, espectrometria de massas e Western blot foram utilizadas para auxiliar na caracterização de peptídeos selecionados. Ensaios de ELISA, ELISA avidez e voltametria de pulso diferencial foram utilizados como plataforma para detecção de anticorpos direcionados contra os alvos propostos neste estudo. A acurácia no diagnóstico da AR e AIJ foi determinada pela curva ROC (Receiver Operating Characteristics). Resultados: O peptídeo M12, selecionado contra IgGs circulantes de camundongos com sinais de artrite, foi capaz de discriminar pacientes com AR de pacientes com outras doenças autoimunes e indivíduos saudáveis (p < 0.0001) com alta acurácia, apresentando 91% de especificidade e 84.3% de sensibilidade. O peptídeo M12 foi identificado como mimético de uma região antigênica da proteína anidrase carbônica III, que já foi previamente identificada como um autoantígeno da AR. Os níveis de anticorpos contra o colágeno tipo II foram significativamente maiores em pacientes com AIJ quando comparados aos níveis obtidos por pacientes com espondilite anquilosante (p = 0.006) e indivíduos saudáveis (p < 0.0001). Além do mais, a detecção de anticorpos contra o colágeno tipo II foi mais frequente em pacientes com &#8804; 6 meses de duração (p =0.0007). Anticorpos apresentando alta avidez para o colágeno tipo II foram associados com a atividade da doença (p = 0.004). O peptídeo PRF+1, selecionado contra IgGs circulantes de pacientes com AIJ, foi capaz de discriminar pacientes com AIJ e AR de pacientes com outras doenças autoimunes e indivíduos saudáveis (p < 0.0001) com alta acurácia, apresentando 91% de especificidade e 61% de sensibilidade para AIJ, e 93% de especificidade e 94% de sensibilidade para AR. O biosensor eletroquímico desenvolvido para detecção de anticorpos contra o peptídeo PFR+1 provou ser uma forma rápida, barata e eficaz de discriminar amostras de soro de pacientes com JIA e RA de indivíduos saudáveis. Conclusão: Em uma análise geral do conjunto de estudos aqui apresentados, é possível concluir que os antígenos utilizados para a detecção de anticorpos circulantes em pacientes com AIJ ou AR podem ser utilizados com alta acurácia para auxiliar no diagnóstico.
Abstract: Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) and juvenile idiopathic arthritis (JIA) are autoimmune rheumatic diseases of unknown cause characterized by inflammation, which can cause joint damage, and in some cases, damage to other parts of the body. To date, there is no single, definitive test for the diagnosis of RA and JIA, which is based on patient history, and various imaging and laboratory tests. In this context, the search for novel biomarkers with high sensitivity and specificity for RA and JIA is of great interest. Objectives: The aim of this study was to select, characterize and validate targets recognized by circulating antibodies that could be potentially described as autoantigens of RA or JIA. Methods: Phage Display technology was used to select peptides binding to circulating antibodies from mice presenting signs of arthritis after collagen type II induction (CIA model), and circulating antibodies from patients with JIA. In silico analysis, mass spectrometry and western blot were used to assist in the characterization of selected peptides. ELISA assays, ELISA avidity and differential pulse voltammetry was used as platform for detection of antibodies directed against the targets proposed in this study. Receiver Operating Characteristics (ROC) curve was determined for diagnostic accuracy for JIA and RA. Results: The M12 peptide selected against circulating IgGs from mice with signs of arthritis was able to discriminate RA patients from patients with other autoimmune diseases and healthy individuals (p < 0.0001) with high accuracy, presenting 91% specificity and 84.3% sensitivity. The M12 peptide was identified in an antigenic region of the protein carbonic anhydrase III, which has been previously identified as a RA autoantigen. The levels of antibodies to type II collagen were significantly higher in patients with JIA compared to levels obtained in patients with ankylosing spondylitis (p = 0.006) and healthy individuals (p < 0.0001). Moreover, the antibodies detection to type II collagen was more frequent in patients with &#8804; 6 months duration (p = 0.0007). Antibodies displaying high avidity to collagen type II were associated with disease activity (p = 0.004). The PRF+1 peptide, selected from circulating IgGs from patients with JIA, was able to discriminate patients with JIA and RA from patients with other autoimmune diseases and healthy individuals (p < 0.0001) with high accuracy, presenting 91% specificity and 61% sensitivity for JIA, and 93% specificity and 94% sensitivity for RA. The electrochemical biosensor designed to detect antibodies against the peptide PFR+1 proved to be a fast, cheap and effective way of discriminating serum samples from patients with RA or JIA from healthy individuals. Conclusion: In a general analysis of the studies presented here, we conclude that the antigens used for the detection of circulating antibodies in patients with RA or JIA can be used with high accuracy to assist in diagnosis.
Keywords: Artrite idiopática juvenil
Artrite reumatoide
Phage display
Autoantígeno
Sorodiagnóstico
Juvenile idiopathic arthritis
Rheumatoid arthritis
Phage display
Autoantigen
Serodiagnosis
Antígenos
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: ARAUJO, Galber Rodrigues. Epítopos miméticos e autoantígenos aplicados ao imunodiagnóstico da artrite reumatoide e artrite idiopática Juvenil oligoarticular e poliarticular. 2015. 151 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15764
Issue Date: 20-Jul-2015
Appears in Collections:TESE - Genética e Bioquímica

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