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metadata.dc.type: Tese
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Influência de combinações de diferentes caotrópicos no espectro visível da hemoglobina e na estabilidade de membrana de eritrócitos humanos
Other Titles: Influence of combinations of different chaotropes in the visible spectrum of hemoglobin
metadata.dc.creator: Arvelos, Cleine Chagas da Cunha
metadata.dc.contributor.advisor1: Silva, Nilson Penha
metadata.dc.contributor.referee1: Paula, Eneida de
metadata.dc.contributor.referee2: Silva, Neide Maria da
metadata.dc.contributor.referee3: Oliveira, Fábio de
metadata.dc.contributor.referee4: Costa, Júnia de Oliveira
metadata.dc.description.resumo: CAPÍTULO II: O presente estudo teve por objetivo investigar a influência de combinações de uréia, etanol e hipotonicidade sobre a estabilidade e o espectro visível de hemoglobina humana. Protocolos com incubação em tempo fixo de 30 minutos a 37 °C foram utilizados para analisar o espectro visível de hemoglobina comercial e de hemoglobina obtida do sangue venoso de 20 voluntários saudáveis. O espectro visível da hemoglobina obtida em nosso laboratório foi compatível com o da oxiemoglobina e sua estabilidade foi monitorada a 540 nm, enquanto o espectro da hemoglobina comercial foi compatível com o da metemoglobina e sua estabilidade foi monitorada a 630 nm. Concentrações de 0-5 M de uréia, 0-20% (v/v) de etanol na ausência e na presença de 1,5 M de uréia e 0-1 g/dL de NaCl na ausência e na presença de 1 M de uréia produziram alterações discretas no espectro visível da oxiemoglobina. Entretanto, além de 5 M de uréia e 20% de etanol a oxiemoglobina sofreu alterações espectrais provavelmente associadas à formação de desoxiemoglobina e em seguida a sua desnaturação. A metemoglobina apresentou uma maior vulnerabilidade aos efeitos dos caotrópicos estudados. Como as transições de hemólise de eritrócitos a 37 ºC ocorrem abaixo de 5 M de uréia e 20% (v/v) de etanol, elas devem sofrer apenas contribuições espectrais discretas desses caotrópicos sobre a oxiemoglobina. CAPÍTULO III: Etanol e uréia são caotrópicos que também exercem ações como osmólitos. Altas concentrações de etanol têm mostrado promover estabilização de eritrócitos. Para melhor entender a origem desse efeito estabilizador, nós avaliamos a influência do calor na hemólise por uréia e a influência da uréia na hemólise por etanol e por estresse hipotônico. Ajustes sigmoidais foram usados para determinar os pontos de meia transição de hemólise por uréia (D50u), etanol (D50e) e estresse hipotônico (H50). Aumento na temperatura promoveu diminuição nos valores de D50u, o que pode ser atribuído aos efeitos caotrópicos sinérgicos do calor e da uréia. Aumento da concentração de uréia levou a uma diminuição dos valores de D50e, indicando uma ação sinérgica de uréia com etanol na promoção de hemólise. Aumento na concentração de uréia levou a uma diminuição dos valores de H50, indicando que a uréia antagonizou os efeitos hemolíticos do estresse hipotônico. As dependências de D50u com a temperatura e de D50e com diferentes concentrações de uréia produziram curvas sigmoidais com amplas transições entre duas diferentes regiões de estabilidade. A dependência de H50 com a concentração de uréia foi definida por uma curva sigmoidal com nítida transição entre duas diferentes regiões de estabilidade. Este comportamento pode ser atribuído a uma melhora na estabilidade de eritrócitos induzida pela combinação dos caotrópicos.
Abstract: CHAPTER II: This study aimed to investigate the influence of combinations of urea, ethanol and hypotonicity on the stability and spectrum of human hemoglobin. Protocols with fixed incubation time of 30 minutes at 37 °C were used to analyze the spectra of commercial hemoglobin and hemoglobin of venous blood obtained from 20 healthy volunteers. The visible spectrum of hemoglobin obtained in our laboratory was consistent with that of hemoglobin and its stability was monitored at 540 nm, while the spectrum of commercial hemoglobin was consistent with that of metahemoglobin and its stability was monitored at 630 nm. Concentrations of 0-5 M urea, 0-20% (V/V) ethanol in the absence and presence of 1.5 M urea and 0-1 g/dL NaCl in the absence and presence of 1 M urea produced discrete changes in the visible spectrum of hemoglobin. However, beyond 5 M urea and 20% ethanol, oxyhemoglobin underwent spectral changes probably associated with the formation of desoxyhemoglobin and then its denaturation. Metahemoglobin showed greater vulnerability to the effects of chaotropic studied. As the transitions of hemolysis of erythrocytes at 37 °C occur below 5 M urea and 20% (V/V) ethanol, they should suffer only discrete spectral contributions of the effects of these chaotropes on oxyhemoglobin. CHAPTER III: Ethanol and urea are chaotropes that also exert actions as osmolytes. High concentrations of ethanol have been shown to promote the stabilization of erythrocytes. To better understand the origin of this stabilization effect, we have evaluated the influence of heat on hemolysis by urea and the influence of urea on hemolysis by ethanol and hypotonic stress. Sigmoidally-defined curves have been used to determine the half-transition points of hemolysis by urea (D50u), ethanol (D50e), and hypotonic stress (H50). Increasing temperature led to a decrease in the value of D50u, which may be ascribed to the synergistic chaotropic effects of heat and urea. Increasing urea concentration led to a decrease in the value of D50e, indicating a synergistic action of urea with ethanol in promoting hemolysis. Increasing urea concentrations led to decreasing values of H50, indicating that urea antagonized the hemolytic effect of hypotonic stress. The dependences of D50u on temperature and of D50e on urea concentration both produced sigmoid-shaped curves with broad transitions between two different regions of stability. The dependence of H50 on the concentration of urea was defined by a sigmoid-shaped curve with a sharp transition between two different regions of stability. This behavior can be attributed to an enhancement of erythrocyte stability induced by the combination of chaotropes.
Keywords: Hemoglobina
Espectro visível
Etanol
Uréia
Estresse hipotônico
Eritrócitos
Estabilidade de membrana
Temperatura
Hemoglobin
Visible spectrum
Ethanol
Urea
Hypotonic stress
Erythrocyte
Membrane stability
Temperature
Membranas (Biologia)
Álcool
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: ARVELOS, Cleine Chagas da Cunha. Influence of combinations of different chaotropes in the visible spectrum of hemoglobin. 2011. 95 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2011.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15720
Issue Date: 19-Jan-2011
Appears in Collections:TESE - Genética e Bioquímica

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