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Document type: Tese
Access type: Acesso Aberto
Title: Purificação e caracterização de uma CA2+ -ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae)
Author: Melo, Hugo Christiano Soares
First Advisor: Coelho, Milton Vieira
First member of the Committee: Hamaguchi, Amélia
Second member of the Committee: Espindola, Foued Salmen
Third member of the Committee: Madurro, Ana Graci Brito
Fourth member of the Committee: Cameron, Luiz Claudio
Summary: CAPITULO III: Miosina pode ser precipitada pelo congelamento e descongelamento de fração solúvel de diferentes tecidos de mamíferos. Nesse trabalho, o objetivo foi precipitar ATPase similar à miosina a partir de fração solúvel de larva de P. nucleorum. A fração solúvel foi congelada a -20 oC e descongelada após 48 horas. O precipitado foi recuperado por centrifugação a 45.000 g x 40 minutos e foi lavado sucessivamente com solução tampão em pH 7,5 e 9,0. Posteriormente, ATPase foi solubilizada pelo tratamento do precipitado com solução tampão pH 9,0 contendo 0,5 mol.L-1 de NaCl. Os principais polipeptídeos da fração ATPase apresentaram Mr de 205 e 45 kDa. Essa fração expressou alta atividade Ca- ATPase, mas não apresentou atividade Mg2+-ATPase e nem K+/EDTA-ATPase. A atividade Ca2+-ATPase não foi inibida por tapsigargina 140 μ mmol.L-1, ouabaína 1,7 mmol.L-1 ou azida 1 mmol.L-1. A atividade foi sensivelmente inibida por magnésio, mas praticamente não foi inibida por cobre ou zinco. A enzima não hidrolisou AMP e nem PPi e hidrolisou muito pouco ADP e GTP. Nesse trabalho, foi isolado um polipeptídeo de 205 kDa de larva de P. nucleorum, que co-purificou com atividade Ca2+-ATPase.
Abstract: CHAPTER III: Myosin can be precipitated by freezing and thawing the soluble fraction of different mammal tissues. In this work, the objective was to precipitate ATPase similar to myosin starting from the soluble fraction of P. nucleorum larva. The soluble fraction was frozen at -20 oC and thawed after 48 h and centrifuged at 45.000 g x 40 min. The precipitaded was recovered and successively washed with buffer solution at pH 7.5 and 9.0. Later, ATPase was solubilized through the treatment of the precipitate with buffer solution pH 9.0 containing 0.5 mmol.L-1 NaCl. The main peptides of the ATPase fraction presented Mr of 205 and 45 kDa. That fraction expressed high Ca2+-ATPase activity, but it did not present or K+/EDTA-ATPase activity. However, Mg2+-ATPase activity appears in the presence of F-actin, and identification by PMF shows similarity of p205 with myosin heavy chain of Tribolium castaneum. The Ca2+-ATPase activity was not inhibited by 140 μmol.L-1 thapsigargin, 1.7 mmol.L-1 ouabain or 1 mmol.L-1 azide, but was greatly inhibited by magnesium. The enzyme did not hydrolyze AMP or PPi and only slightly hydrolyze ADP and GTP. In this work, we isolated a polypeptide from 205 kDa of P. nucleorum larvae that was co-purified with Ca2+-ATPase activity.
Keywords: Purificação
ATPase
Larva
Pachymerus
Purification
Larvae
Proteínas
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Quote: MELO, Hugo Christiano Soares. Purificação e caracterização de uma CA2+ -ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae). 2008. 109 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15699
Date of defense: 9-Jul-2008
Appears in Collections:TESE - Genética e Bioquímica

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