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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15699
Document type: | Tese |
Access type: | Acesso Aberto |
Title: | Purificação e caracterização de uma CA2+ -ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae) |
Author: | Melo, Hugo Christiano Soares |
First Advisor: | Coelho, Milton Vieira |
First member of the Committee: | Hamaguchi, Amélia |
Second member of the Committee: | Espindola, Foued Salmen |
Third member of the Committee: | Madurro, Ana Graci Brito |
Fourth member of the Committee: | Cameron, Luiz Claudio |
Summary: | CAPITULO III: Miosina pode ser precipitada pelo congelamento e descongelamento de fração solúvel de diferentes tecidos de mamíferos. Nesse trabalho, o objetivo foi precipitar ATPase similar à miosina a partir de fração solúvel de larva de P. nucleorum. A fração solúvel foi congelada a -20 oC e descongelada após 48 horas. O precipitado foi recuperado por centrifugação a 45.000 g x 40 minutos e foi lavado sucessivamente com solução tampão em pH 7,5 e 9,0. Posteriormente, ATPase foi solubilizada pelo tratamento do precipitado com solução tampão pH 9,0 contendo 0,5 mol.L-1 de NaCl. Os principais polipeptídeos da fração ATPase apresentaram Mr de 205 e 45 kDa. Essa fração expressou alta atividade Ca- ATPase, mas não apresentou atividade Mg2+-ATPase e nem K+/EDTA-ATPase. A atividade Ca2+-ATPase não foi inibida por tapsigargina 140 μ mmol.L-1, ouabaína 1,7 mmol.L-1 ou azida 1 mmol.L-1. A atividade foi sensivelmente inibida por magnésio, mas praticamente não foi inibida por cobre ou zinco. A enzima não hidrolisou AMP e nem PPi e hidrolisou muito pouco ADP e GTP. Nesse trabalho, foi isolado um polipeptídeo de 205 kDa de larva de P. nucleorum, que co-purificou com atividade Ca2+-ATPase. |
Abstract: | CHAPTER III: Myosin can be precipitated by freezing and thawing the soluble fraction of different mammal tissues. In this work, the objective was to precipitate ATPase similar to myosin starting from the soluble fraction of P. nucleorum larva. The soluble fraction was frozen at -20 oC and thawed after 48 h and centrifuged at 45.000 g x 40 min. The precipitaded was recovered and successively washed with buffer solution at pH 7.5 and 9.0. Later, ATPase was solubilized through the treatment of the precipitate with buffer solution pH 9.0 containing 0.5 mmol.L-1 NaCl. The main peptides of the ATPase fraction presented Mr of 205 and 45 kDa. That fraction expressed high Ca2+-ATPase activity, but it did not present or K+/EDTA-ATPase activity. However, Mg2+-ATPase activity appears in the presence of F-actin, and identification by PMF shows similarity of p205 with myosin heavy chain of Tribolium castaneum. The Ca2+-ATPase activity was not inhibited by 140 μmol.L-1 thapsigargin, 1.7 mmol.L-1 ouabain or 1 mmol.L-1 azide, but was greatly inhibited by magnesium. The enzyme did not hydrolyze AMP or PPi and only slightly hydrolyze ADP and GTP. In this work, we isolated a polypeptide from 205 kDa of P. nucleorum larvae that was co-purified with Ca2+-ATPase activity. |
Keywords: | Purificação ATPase Larva Pachymerus Purification Larvae Proteínas |
Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA |
Language: | por |
Country: | BR |
Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
Institution Acronym: | UFU |
Department: | Ciências Biológicas |
Program: | Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica |
Quote: | MELO, Hugo Christiano Soares. Purificação e caracterização de uma CA2+ -ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae). 2008. 109 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008. |
URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15699 |
Date of defense: | 9-Jul-2008 |
Appears in Collections: | TESE - Genética e Bioquímica |
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