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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Influência de crioprotetores e pré-adaptação na viabilidade e produção de transcritos por cepas de Campylobacter jejuni mantidas a -20°c
Other Titles: Influence of cryoprotectants and pretreatment on viability and producition of transcripts in strains Campylobacterjejuni kept at -20°c
metadata.dc.creator: Moura, Mariela Silva
metadata.dc.contributor.advisor1: Rossi, Daise Aparecida
metadata.dc.contributor.referee1: Rezende, Cíntia Silva Minafra e
metadata.dc.contributor.referee2: Fonseca, Belchiolina Beatriz
metadata.dc.description.resumo: Campylobacter é considerado um microrganismo frágil e sensível às condições ambientais, mas que demonstram possuir estratégias para sobreviver em condições ambientais desfavoráveis. Este estudo avaliou a viabilidade e produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas ATCC 33291, NCTC 11351 e IAL 2383 armazenadas em leite UHT integral e neopeptona + glicerol 12%, submetidas ou não a pré-tratamentos à temperatura de 4°C ou 10°C por 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após manutenção por 30, 60 e 90 dias a -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultivo e a produção de transcritos pela técnica do RTPCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentaram média de 3,0 x 107 UFC, sendo que nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente não permitindo sua enumeração. O conjunto de resultados permitiu verificar que o leite UHT integral foi mais adequado para a criopreservação que o uso da neopeptona + glicerol 12%. O pré-tratamento a 4ºC por 30 minutos favoreceu a produção de transcritos para os genes ciaB e dnaJ. Para as cepas ATCC 33291 e NCTC 11351 foi verificada uma possível interligação dos genes sodB e p19, entretanto, esta ligação não foi observada para a cepa IAL 2383, que também mostrou comportamento diferente das outras cepas quanto à viabilidade nos dois crioprotetores e produção de transcritos. Os resultados obtidos neste estudo permitem concluir que quando a manutenção da viabilidade das cepas é essencial, faz-se necessário o uso das diferentes combinações crioprotetor/tratamentos para aumentar as chances de recuperação e, quando o objetivo principal é a produção de transcritos, a opção para manter a fidedignidade dos resultados é a extração imediata do DNA das estirpes isoladas.
Abstract: Campylobacter is considered a fragile microorganism ans sensitive to environmental conditions, but demostrate strategies to survive in unfavorable environmental conditions. This study evaluated the viability and production of transcipts of the genes sodB, p19 ciaB and dnaJ in strains ATCC 33291, NCTC 11351 and IAL 2383 stored in UHT milk and neopeptona + 12% glycerol,whether or not subject to the pre-treatment temperature of 4°C or 10°C for 30 minutes.Analyses were performed immediately after freezing in liquid nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60 and 90 days at -20°C.The viability was evaluated by traditional method of cultivation and production of transcripts by RT-PCR technique. The quantification was only possible on the first day of analysis (day 0) and had a mean of 3.0x107UFC and in the remaining periods of storage strains showed confluent growth not allowing their enumeration. The set of results has shown that the UHT milk was the most appropriate for cryopreservation than the use of neopeptona +12% glycerol. The pretreatment at 4°C for 30 minutes favored the production of transcripts for ciaB and dnaJ genes. For the strains ATCC 33291 and NCTC 11351 was verified a possible interconnection of sodB genes and p19, however, this link was not observed for the strain IAL 2383, which also showed different behavior from other strains for viability in both cryoprotectants and production of transcripts. The results of this study show that when the maintenance of viability of the strains is essential, it is necessary to use different combinations of cryoprotectants / treatments to increase the chances of recovery and, when the primary purpose is the production of transcripts, the option to maintain the reliability of the results is the immediate extraction of DNA of isolated strains.
Keywords: Campylobacter
Criopreservação
Pré-tratamento
RT-PCR
Cryopreservation
Pretreatments
Produção animal
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Agrárias
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias
Citation: MOURA, Mariela Silva. Influence of cryoprotectants and pretreatment on viability and producition of transcripts in strains Campylobacterjejuni kept at -20°c. 2013. 74 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Agrárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2013.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/13068
Issue Date: 22-Mar-2013
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Ciências Veterinárias

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