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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Produção e utilização de anticorpos IgY para diagnóstico de brucelose
Alternate title (s): Production and use of IgY antibodies for diagnosis of brucellosis
Author: Soares, Pollyanna Mafra
First Advisor: Lima, Anna Monteiro Correia
First member of the Committee: Mathias, Luís Antonio
Second member of the Committee: Ferreira Júnior, Álvaro
Summary: A dissertação foi dividida em cinco capítulos. O primeiro foi denominado Consideração Gerais , no qual foi realizada uma breve revisão de literatura sobre o que foi proposto no trabalho. No segundo capítulo, objetivou-se verificar se galinhas imunizadas com vacina B19 de Brucella abortus e extrato proteico solúvel extraído dessa vacina, poderiam produzir anticorpos policlonais específicos, detectáveis em testes de ELISA indireto. Foram imunizadas seis galinhas com 25 semanas de idade, da linhagem White Leghorn, sendo duas imunizadas com a vacina B19, duas com uma solução de extrato proteico solúvel extraída a partir da vacina B19 e duas foram usadas como controle, sendo imunizadas com PBS. Coletas de sangue foram realizadas quinzenalmente, e de ovos, diariamente durante 13 semanas. Anticorpos policlonais IgY foram purificados a partir da gema dos ovos utilizando para a delipidação o método de diluição em água acidificada (pH 5,0 5,2) e a precipitação com sulfato de amônio (20%). Realizou-se teste de ELISA indireto para verificar a especificidade da IgY. Foi possível observar a produção de anticorpos policlonais específicos contra os antígenos utilizados nas imunizações, tanto no soro quanto nas gemas. No terceiro capítulo, objetivou-se verificar a resposta da IgY extraída da gema do ovo de galinhas imunizadas com vacina B19 (IgY anti-B19) frente ao antígeno EPS e a resposta da IgY extraída da gema do ovo de galinhas imunizadas com EPS (IgY anti-EPS) frente ao antígeno vacina B19, utilizando-se o ELISA indireto, a fim de verificar possíveis interações antígeno-anticorpo. Para isso, foram sensibilizadas duas placas de microtitulação, uma utilizando como antígeno a vacina B19 e outra com antígeno o EPS, em cada placa foram colocados como anticorpos primários IgY extraída da gema do ovo, referente a cada grupo de galinhas imunizadas, sendo um grupo de galinhas imunizadas com vacina B19, um com EPS e um controle. Tanto IgY anti-B19 como IgY anti-EPS foram reagentes aos antígenos testados, portanto, acredita-se que esses anticorpos possam servir de ferramenta na identificação de antígenos em testes diagnósticos que visam este fim. O quarto capítulo teve como objetivo avaliar a resposta imune humoral de bovinos naturalmente infectados e recém-vacinados com a vacina B19 frente aos antígenos EPS e vacina B19 em ELISA indireto. Utilizou-se nesse estudo 96 amostras de soro sanguíneo de bovinos, sendo 32 de bezerras recém-vacinadas, 32 de animais naturalmente infectados e 32 de animais negativos para brucelose. Verificou-se que o teste de ELISA indireto com o antígeno EPS, quando comparado aos testes de ELISA indireto com o antígeno vacina B19 e ao 2-ME, foi capaz de diferenciar os animais recém-vacinados dos animais naturalmente infectados. No quinto capítulo estão as considerações finais sobre toda a dissertação, incluindo conclusões relativas a todos os capítulos.
Abstract: The dissertation was divided into five chapters. The first was called \"General Consideration,\" which was performed a brief literature review about what was proposed in the work. In the second chapter aimed to check whether chickens immunized with Brucella abortus B19 vaccine and soluble protein extract solution, extracted from this vaccine, could produce specific polyclonal antibodies, detectable in indirect ELISA tests. Six hens with 25 week-old, White Leghorn breed, were immunized, two immunized with B19, two with a soluble protein extract solution extracted from the B19 vaccine and two were used as controls, being immunized with PBS. Blood samples were taken fortnightly and eggs daily for 13 weeks. Polyclonal antibodies IgY were purified from egg yolk using for delipidation the dilution method in acidified water (pH 5,0-5,2) and precipitation with ammonium sulfate. Was performed ELISA test to verify the specificity of IgY. Was possible to observe the production of specific polyclonal antibodies against the antigens used in the immunizations, both in serum and in egg yolks. In the third chapter aimed to check the response of IgY extracted from egg yolk of immunized chickens with B19 vaccine (IgY anti- B19) against the antigen EPS and the response of IgY extracted from egg yolk of immunized chickens with EPS (IgY anti-EPS) against the vaccine antigen B19, using the ELISA in order to verify possible antigen-antibody interactions. For this, two microtiter plates were sensitized, in one of them using B19 vaccine as antigen and another EPS antigen, were placed on each plate as primary antibodies IgY extracted from the egg yolk, for each group of immunized hens, a group immunized chickens with vaccine B19, one with EPS and one control. Both IgY anti-B19, as IgY anti-EPS were reactive to the antigens tested, so it is believed that these antibodies may serve as a tool for the identification of antigens in diagnostic tests aimed at this purpose. The objective of fourth chapter was to evaluate the humoral immune response of cattle naturally infected and newly vaccinated with B19 vaccine against EPS and B19 vaccine antigens in indirect ELISA. Was used in this study 96 samples of blood serum of cattle, 32 heifers recently vaccinated with B19 vaccine, 32 naturally infected cattle and 32 negative cattle for brucellosis. Was verified that in the indirect ELISA with antigen EPS when compared with indirect ELISA with antigen vaccine B19 and 2-ME, this test was able to distinguish newly vaccinated animals of naturally infected animals. The fifth chapter are the \"final thoughts\" on the entire dissertation, including findings of all the chapters.
Keywords: Imunoglobulinas
Galinhas
Brucella abortus
Immunoglobulin
Chickens
Brucelose - Diagnóstico
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Agrárias
Program: Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias
Quote: SOARES, Pollyanna Mafra. Production and use of IgY antibodies for diagnosis of brucellosis. 2013. 119 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Agrárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2013.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/13058
Date of defense: 28-Feb-2013
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Ciências Veterinárias

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