Publicação: Isolamento e criopreservação de folículos ovarianos pré-antrais
de marrãs pré-púberes
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CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
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Objetivou-se neste estudo isolar mecanicamente e criopreservar com glicerol nas
concentrações de 1,5 e 3 M folículos ovarianos pré-antrais de marrãs pré-púberes.
Foram utilizados ovários (n=18) de marrãs pré-púberes seccionados em tissue
chopper em intervalos de 250 e 500 μm. A quantificação folicular foi realizada em
câmara de neubauer e a análise de viabilidade em microscópio. No intervalo de
corte de 250 μm o número médio de folículos isolados foi de 168.889 ± 69.017,
enquanto que no corte de 500 μm o número médio foi de 180.000 ± 92.800, sendo
que em ambos os intervalos o número médio de folículos pré-antrais foram
estatisticamente iguais. A taxa de viabilidade folicular foi de 76,50% e 74,08% nos
intervalos de corte 250 e 500 μm, respectivamente, não apresentando diferença
estatística. No segundo estudo foram utilizados (n=12) ovários de marrãs prépúberes
processados mecanicamente com fatiador de tecido (tissue chopper) com
intervalo de corte de 250 μm. Para teste de toxicidade foram adicionados glicerol na
concentração final de 1,5 e 3 M. A taxa de viabilidade dos folículos pré-antrais no
grupo controle sem glicerol 72,72%, após exposição ao glicerol 1,5 M (tox-1,5) e 3
M (tox-3) foi 62,15% e 12,07%, respectivamente, sendo que não houve diferença
estatística entre o controle sem glicerol e o tox-1,5 e sim entre controle sem glicerol
e tox-3 e entre tox-1,5 e tox-3. Após o procedimento de criopreservação/
descongelamento o número de folículos pré-antrais viáveis foi de 18,88% no grupo
glicerol 1,5 M (crio-1,5) e 2,81% no grupo glicerol 3 M (crio-3) não apresentaram
diferenças significativas. Em crio-1,5 e crio-3 as taxas de viabilidade em relação ao
grupo controle sem glicerol (72,72%) apresentaram-se significativamente diferentes
e baixas e entre crio-1,5 e crio-3 não foram significativas. A análise de viabilidade
do teste de toxicidade e de criopreservação/ descongelamento com o glicerol, na
concentração de 1,5 M (tox-1,5 e crio1,5) foi significativamente menor em crio-1,5,
enquanto que esta mesma análise na concentração 3 M (tox-3 e crio-3) não houve
diferenças. Conclui-se que ambos os intervalos de cortes (250 e 500 μm) podem ser
utilizados no isolamento de folículos ovarianos pré-antrais de marrãs pré-púberes
com a mesma eficiência e após exposição ao glicerol 1,5 M apresentaram melhor taxa de viabilidade, porém em ambas as concentrações 1,5 e 3 M a criopreservação
não foi satisfatória.
Abstract
The aim of this study it was to isolate mechanically and cryopreserve ovarian follicles
from pre pubertal gilts; with glycerol on the concentrations of 1,5 M and 3 M.
Eighteen ovaries from pre pubertal gilts were used (n = 18) sectioned using tissue
chopper in sections with interval of 250 e 500 μm. The follicular quantifying was
performed in neubauer chamber and the viability analysis in microscope. In the
section of 250 μm the mean number of isolated follicles was 168.889 ± 69.017, while
on the section of 500 μm the mean number was 180.000 ± 92.800, being in both
sections the mean number of preantral follicles were statistically similar. The rate of
follicular viability was 76,50% and 74,08% in the sections of 250 and 500 μm,
respectively, not showing significant difference. In the second study were used
twelve (n=12) ovaries from pre pubertal gilts processed mechanically in tissue
chopper, making sections of 250 μm. Designed to the toxicity test, glycerol was
added on the final concentration of 1,5 e 3 M. The rate of viability of preantral follicles
on the control group without glycerol 72,72 %, after exposition to glycerol 1,5 M (tox-
1,5) and 3 M (tox-3) was 62,15% and 12,07%, respectively, being that there was no
statistical difference between the control without glycerol and the tox-1,5 and there
was between control without glycerol and tox-3 and between tox-1,5 and tox-3. After
the cryopreservation/thawing procedure the number of viable preantral follicles was
18,88% on the glycerol group 1,5 M (cryo-1,5) and 2,81% on the group glycerol 3M
(cryo-3) did not show statistical difference. At cryo-1,5 and cryo-3 the rates of viability
in relation to the control group without glycerol (72,72%) showed significantly
different and low, and between cryo-1,5 and cryo-3 were not significant. The analysis
of viability from the test of toxicity and cryopreservation/thawing with glycerol, on the
concentration of 1,5 M (tox-1,5 and cryo1,5) was significantly lower in cryo 1,5, while
at the same analysis on the concentration of 3 M (tox-3 and cryo-3) there was no
difference. In conclusion, both interval of section (250 and 500 μm) can be used on
the isolation of ovarian follicles from pre pubertal gilts with the same efficiency and
after the exposition to glycerol 1,5 M showed the best viability rate, however in both
concentrations 1,5 e 3 M the cryopreservation was not satisfactory.
Palavras-chave
Isolamento, Viabilidade, Glicerol, Marrãs, Isolation, Viability, Glycerol, Gilt, Reprodução animal
Citação
ROCHA, Carina Diniz. Isolation and cryopreservation of ovarian preantral follicles from pré pubertal
gilts. 2011. 62 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Agrárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2011.