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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Diagnóstico molecular da hanseníase com biomarcadores ML0024 e 85B pela PCR em tempo real
metadata.dc.creator: Figueira, Márcia Moura Nunes Rocha
metadata.dc.contributor.advisor1: Goulart, Isabela Maria Bernardes
metadata.dc.contributor.referee1: Neves, Adriana Freitas
metadata.dc.contributor.referee2: Vieira, Carlos Ueira
metadata.dc.contributor.referee3: Goulart, Vivian Alonso
metadata.dc.description.resumo: Hanseníase é uma doença espectral, causada pelo Mycobacterium leprae, cujo diagnóstico é clínico-laboratorial, realizado por meio de técnicas baciloscópicas de baixa sensibilidade e especificidade, que não detectam o bacilo nas formas paucibacilares (PB). No presente estudo foram testados marcadores moleculares por qPCR, com a finalidade de auxiliar o diagnóstico da doença, principalmente na forma PB. O DNA total de biópsia de lesão de pele foi extraído de 185 pacientes virgens de tratamento. A qPCR foi realizada utilizando pares de primers para amplificação da sequência ML0024 e 85B do genoma do bacilo. Ambos marcadores foram altamente específicos. A detecção do DNA do bacilo pela qPCR ML0024 e qPCR 85B foi 59,45% (110/185) e 57,29% (106/085), respectivamente, enquanto o Índice Baciloscópico (IB) de esfregaço dérmico e de lesão de pele detectaram, respectivamente, a presença do bacilo em 45,94% (85/185) e 44,86% (83/185) dos casos. Dentre todos os casos negativos para o IB de esfregaço dérmico, a qPCR ML0024 e qPCR 85B detectaram a presença do DNA do bacilo em 26,00% (26/100) e 23,00% (23/100), respectivamente. Entre aqueles negativos para o IB de lesão de pele, a qPCR ML0024 foi positiva em 27,45% (28/102) e a qPCR 85B em 23,52% (24/102). Observou-se diferença significativa entre a positividade dos testes moleculares e os dois testes baciloscópicos (p<0,0001) para as formas clínicas T, DT- e DT+. A concordância entre os resultados da qPCR ML0024 e qPCR 85B foi superior a 90,00% e apresentou excelente replicabilidade. Entre os testes baciloscópicos e os testes moleculares as concordâncias observadas foram superiores a 80,00%. Quanto à análise quantitativa, observou-se correlação positiva entre as formas clínicas e a carga bacilar. Os marcadores moleculares avaliados neste estudo possuem igualmente o mesmo número de cópias no genoma, são específicos, apresentam praticamente o mesmo tamanho de amplicon e possuem comportamentos semelhantes, embora não apresentando diferenças significativas na sensibilidade. Portanto, esse trabalho vem corroborar com a classificação de Ridley-Jopling (1966) mostrando a presença de DNA do M. leprae em amostras cujos testes baciloscópicos foram negativos; correlacionando-se diretamente com a carga bacilar de cada forma clínica do espectro da doença, ampliando o diagnóstico de certeza na hanseníase.
Abstract: Leprosy is a spectral disease caused by Mycobacterium leprae, whose clinical and laboratory diagnosis is performed by means of sputum smear techniques of low sensitivity and specificity, they do not detect the bacilli in paucibacillary (PB). In the present study were tested by qPCR molecular markers, in order to assist the diagnosis of disease, mainly in the form PB. The total DNA of skin lesion biopsy was taken from 185 treatment-naïve patients. The qPCR was performed using primer pairs for amplification of the sequence ML0024 and 85B of the genome of the bacillus. Both markers were highly specific. Detection of DNA of the bacillus by qPCR and qPCR ML0024 85B was 59.45% (110/185) and 57.29% (106/085), respectively, while the bacterial index (BI) smear and dermal skin lesion detected, respectively, the presence of the bacillus in 45.94% (85/185) and 44.86% (83/185) of cases. Among all cases negative for the IB dermal smear, the qPCR and qPCR ML0024 85B detected the presence of the bacillus DNA in 26.00% (26/100) and 23.00% (23/100), respectively. Among those negative for the IB skin lesions, the ML0024 qPCR was positive in 27.45% (28/102) and qPCR 85B in 23.52% (24/102). There was significant difference between positive molecular tests and two tests bacilloscopic (p <0.0001) for the clinical forms of T, and DT-DT +. The agreement between the results of qPCR and qPCR ML0024 85B was more than 90.00% and showed excellent repeatability. Among the tests and molecular tests bacilloscopic the concordance observed were higher than 80.00%. As for the quantitative analysis, we observed a positive correlation between the clinical forms and bacillary load. Molecular markers evaluated in this study also have the same number of copies in the genome, are specific, have virtually the same amplicon size and have similar behavior, although with significant differences in sensitivity. Therefore, this study corroborates with the Ridley- Jopling classification (1966) showing the presence of DNA of M. leprae in samples bacilloscopic whose tests were negative, correlating directly with the bacterial load of each clinical spectrum of disease, increasing certainty in the diagnosis of leprosy.
Keywords: Hanseníase
Mycobacterium leprae
Pele
PCR em tempo real
Paciente
Leprosy
Skin
Real time PCR
Patient
Imunohistoquímica
Imunologia
Pele - Doenças
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências da Saúde
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde
Citation: FIGUEIRA, Márcia Moura Nunes Rocha. Diagnóstico molecular da hanseníase com biomarcadores ML0024 e 85B pela PCR em tempo real. 2010. 80 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12707
Issue Date: 17-Nov-2010
Appears in Collections:PGCS - Mestrado em Ciências da Saúde

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