Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12420
metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Estudo das respostas dos astrócitos hipotalâmicos ao tratamento in vitro com ácidos graxos saturados
metadata.dc.creator: Oliveira, Ariadne de Almeida Branco
metadata.dc.contributor.advisor1: Zanon, Renata Graciele
metadata.dc.contributor.referee1: Rodrigues, Aldo Rogelis Aquiles
metadata.dc.contributor.referee2: Dezonne, Rômulo Sperduto
metadata.dc.description.resumo: Dietas ricas em gordura induzem a formação de sinais inflamatórios no hipotálamo que diminui sua capacidade de resposta aos hormônios leptina e insulina, envolvidos com o controle da saciedade e fome. O hipotálamo contém uma grande quantidade de células gliais destacando-se os astrócitos, que são incorporados em grupos heterogêneos de neurônios que participam do circuito de controle da homeostase energética, adicionalmente, estão envolvidos com vários processos, incluindo a neuroinflamação. Nesse sentido, o presente trabalho buscou estudar o papel dos astrócitos hipotalâmicos nas respostas frente ao excesso de ácidos graxos e a interação dessas células com neurônios também do hipotálamo. Para tanto, foram utilizadas culturas primárias de astrócitos hipotalâmicos e culturas primárias de neurônios hipotalâmicos. O meio removido de culturas de astrócitos tratados com ácido graxo (estereato ou palmitato) ou LPS (controle positivo) foi usado sobre culturas neuronais para posterior estudo da sinaptogênese in vitro, ainda, foi realizada a dosagem das citocinas presentes nesse meio condicionado com o kit CBA mouse-Th1/Th2/Th17 através de citometria de fluxo com o intuito de analisarmos o perfil de resposta inflamatória em função dos diferentes tratamentos. Com base nesse resultado, vimos que o tratamento com ácido graxo promoveu um perfil de resposta Th2 (anti-inflamatório), principalmente quando comparado ao controle LPS de perfil Th1 (pró-inflamatório). Após o tratamento, o RNA total dos astrócitos foi extraído para a realização do sequenciamento de transcritos por RNA-Seq. Através da análise dos genes diferencialmente expressos entre os grupos, observou-se que o tratamento com ácido graxo induziu uma resposta inflamatória, porém de menor intensidade em relação ao tratamento com LPS, e, ao mesmo tempo, alguns genes relacionados com neuroproteção também foram mais expressos por astrócitos tratados com ácido graxo, colaborando com os dados do CBA. A cultura de neurônio foi padronizada em nosso laboratório e, posteriormente, tratada com meio condicionado. Através de imunomarcação, observou-se que o tratamento com o meio condicionado em astrócitos tratados com ácidos graxos reduziu a densidade sináptica total, atingindo, principalmente sinapses excitatórias, no entanto, o número de neurônios foi semelhante entre os tratamentos, porém, com a presença de um menor número de núcleos picnóticos com o tratamento de ácidos graxos. Estes resultados sugerem um papel ativo dos astrócitos frente à inflamação induzida pelo excesso de ácidos graxos participando da modulação da resposta inflamatória, aparentemente, com efeitos neuroprotetores.
Abstract: High-fat diets induce the formation of inflammatory signals in the hypothalamus which reduces their ability to respond to the hormones leptin and insulin, involved with the control of satiety and food intake. The hypothalamus contains a large amount of glial cells highlighting the astrocytes, which are incorporated in heterogeneous groups of neurons that participate in the control circuit of energy homeostasis, additionally, they are involved in various processes, including the neuroinflammation. In this sense, the present study aimed to investigate the role of hypothalamic astrocyte responses in front of excess fatty acids and the interaction of these cells with neurons of the hypothalamus. For that, we used primary cell cultures of hypothalamic astrocytes and primary cultures of hypothalamic neurons. The medium removed from astrocyte cultures treated with fatty acid (estereato or palmitate) or LPS (positive control) was used on neuronal cultures for further in vitro study of synaptogenesis, also, measurement of cytokines present in conditioned medium was performed with the CBA kit mouse-Th1 /Th2/Th17 by flow cytometry with the aim of analyzing the profile of inflammatory response considering the different treatments. In front of this result, we have seen that the treatment with fatty acid promoted a profile of Th2 response (anti-inflammatory), especially when compared to Th1 profile (pro-inflammatory) of the LPS control. After the treatment, the total RNA of astrocytes was extracted for the sequencing of transcripts by RNA-Seq. Through the analysis of the genes differentially expressed between the groups, it was observed that treatment with fatty acid induced an inflammatory response, however, with lesser intensity in relation to treatment with LPS, and, at the same time, some genes related to neuroprotection were more expressed in astrocytes treated with fatty acid, collaborating with the data of the CBA. The culture of neuron was standardized in our laboratory and, subsequently, treated with conditioned medium. By immunostaining, we observed that treatment with the conditioned medium in astrocytes treated with fatty acids reduced the total synaptic density, primarily affecting excitatory synapses, on the other hand, the number of neurons was similar between treatments, however, with the presence of a reduced number of pyknotic nuclei after the treatment with fatty acids. These results suggest an active role of astrocyte in inflammation induced by the excess of fatty acids, participating in the modulation of the inflammatory response, apparently, with neuroprotective effects.
Keywords: Astrócitos
Ácido graxo
Hipotálamo
Astrocytes
Fatty acid
Hypothalamus
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biomédicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
Citation: OLIVEIRA, Ariadne de Almeida Branco. Estudo das respostas dos astrócitos hipotalâmicos ao tratamento in vitro com ácidos graxos saturados. 2015. 81 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biomédicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12420
Issue Date: 30-Nov-2015
Appears in Collections:PPGBC - Mestrado em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
EstudoRespostasAstrocitos.pdf3.92 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.