Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12408
metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Infecção por Toxoplasma gondii promove a disfunção da barreira epitelial na linhagem de células Caco-2
metadata.dc.creator: Briceño, Marisol Patricia Pallete
metadata.dc.contributor.advisor1: Silva, Neide Maria da
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Lima, Wânia Rezende
metadata.dc.contributor.referee1: Beletti, Marcelo Emílio
metadata.dc.contributor.referee2: Oliveira, Karine Rezende de
metadata.dc.description.resumo: Toxoplasma gondii, um parasito do filo Apicomplexa, é um patógeno intracelular obrigatório sendo responsável por 10-50% de infecções humanas em todo mundo. Portanto, é de se esperar que componentes tanto do parasito quanto da célula hospedeira auxiliem T. gondii na invasão ao epitélio intestinal. Embora, os mecanismos pelos quais o parasito estabelece a infecção no trato intestinal ainda não estão bem estabelecidos. Nosso objetivo foi avaliar aspectos morfofisiológicos da linhagem celular Caco-2 frente às infecções por T. gondii. Foram avaliados os efeitos na endocitose e permeabilidade paracelular por meio do dextran em células infectadas, a integridade e a distribuição das microvilosidades (utilizando faloidina para detecção de actina), a formação da junção de oclusão (através da localização celular da ocludina), a mensuração da resistência elétrica transepitelial (TEER), e a expressão de citocinas IL-1β e IL-8. A inibição da via de sinalização Notch também foi avaliada nas células Caco-2 frente ao parasito. Nossos resultados demonstraram que a endocitose de dextran foi menor nas células infectadas. Devido à infecção pôde ser claramente observada a perda das microvilosidades, quando comparada com células não infectadas. Quanto à distribuição da ocludina, foi observado um padrão de distribuição tipo rede de forma íntegra nas células não infectadas. Por outro lado, as células infectadas com T. gondii mostraram que a ocludina está localizada de forma descontinua na membrana apical. Consequentemente pode-se observar uma diminuição da TEER devido alteração da junção de oclusão nas células infectadas. Sobre a expressão de RNAs mensageiros, observou-se um aumento da citocina IL-8 e uma tendência de aumento de IL-1β na presença de T. gondii. A inibição da via Notch nas células Caco-2 afetou a proliferação do parasito. Estes resultados sugerem a influência da invasão de T. gondii na homeostase intestinal, incluindo alterações na permeabilidade e de distribuição da ocludina e actina. Em estudos posteriores, a inclusão de sistemas in vivo poderá ampliar e reforçar esses resultados.
Abstract: Toxoplasma gondii, a zoonotic Apicomplexa phylum parasite, is an obligate intracellular pathogen responsible for 10-50% of human infections worldwide. Cell invasion is essential for parasite surviving. Thus, it is expected that both parasite and host cell compounds help T. gondii succeed invasion at intestinal environment. Moreover, the mechanisms by which the parasite invades and disseminates through the gastrointestinal tract are not well established. We aimed to evaluate and determine some morphophysiologic modifications on the cell line Caco-2 during T. gondii infection. To accomplish this, we addressed to assess the effect on dextran endocytosis and paracellular permeability of infected cells, investigate the effect of T. gondii on Caco-2 microvilli (using phalloidin for actin detection) and tight junction integrity (by occludin detection) on this cell line. To establish whether T. gondii infection can modify the transepithelial electrical resistance (TEER), and IL-1β and IL-8 cytokines expression. Moreover, we took further to study the influence of Notch pathway in Caco-2 cells infected with this parasite. Our results show that dextran endocytosis is less in infected cells than in non-infected cells. Caco-2 brush border was disrupted due T. gondii infection showing a dissipation of microvilli at the cell surface. The infection outcome could be clearly observed by loss of microvilli when comparing non-infected cells. For evaluated the effect of T. gondii infection on occludin distribution, we performed immunofluorescences. Occludin was observed in a net pattern on control cells, however this patter is not well establish in the presence of the parasite. In addition, the protein localization was clearly lower at infected cells, compared to non-infected ones. TEER in Caco-2 cells infected decreased than in non-infected control. There was an increase in IL-8 and an increasing tendency in IL-1β mRNAs expression when Caco-2 cells were infected. Furthermore, intracellular proliferation of T. gondii diminishes in the presence of Notch pathway inhibitor. These results suggest the important influence of T. gondii invasion on the homeostasis of intestinal cells including tight junction and brush border integrity and, cell permeability leading loss of epithelia polarity. Nevertheless, further investigation using animal model is need to better understand the effect of T. gondii infection on polarity and cell surface.
Keywords: Toxoplasma gondii
Ocludina
Dextran
Actina
Polaridade
Caco-2
Occludin
Actin
Polarity
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biomédicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
Citation: BRICEÑO, Marisol Patricia Pallete. Infecção por Toxoplasma gondii promove a disfunção da barreira epitelial na linhagem de células Caco-2. 2015. 57 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biomédicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12408
Issue Date: 26-Mar-2015
Appears in Collections:PPGBC - Mestrado em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
InfeccaoToxoplasmaGondii.pdf6.35 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.