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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: BmooMPα-III : uma metaloprotease purificada da peçonha da serpente Bothrops moojeni
metadata.dc.creator: Silva, Thalita Kristhina Alves
metadata.dc.contributor.advisor1: Oliveira, Fábio de
metadata.dc.contributor.referee1: Costa, Júnia de Oliveira
metadata.dc.contributor.referee2: Santos Filho, Norival Alves
metadata.dc.description.resumo: As enzimas proteolíticas presentes nas peçonhas botrópicas são responsáveis pela maioria dos efeitos locais e sistêmicos observados durante o envenenamento. Nesse trabalho, descrevemos a purificação e a caracterização de uma nova metaloprotease da peçonha da serpente Bothrops moojeni. A enzima, denominada de BmooMPα-III, foi purificada pela combinação das cromatografias de troca iônica (DEAE Sephacel), exclusão molecular (Sephadex G-75) e afinidade (HiTrap Chelating HP). A enzima BmooMPα-III representa cerca de 0,75 % da peçonha total e apresenta banda única com uma massa molecular aparente de 26 kDa, quando analisada por SDS-PAGE, sob condições redutoras. BmooMPα-III cliva primeiro a cadeia A, depois a B, mas não hidrolisa a cadeia  do fibrinogênio bovino. A inibição da atividade fibrinogenolítica por agente quelante de íons metálicos como EDTA permite classificá-la como uma metaloprotease. A enzima também foi inibida pelo -mercaptoetanol, entretanto, inibidores de proteases tais como benzamidina, aprotinina, PMSF e leupeptina não afetam esta atividade. A enzima é inativa em altas temperaturas ( 60 oC) e apresenta atividade máxima em pH em torno de 7,0 10,0. BmooMPα-III causa efeito tóxico sobre as células hepáticas e renais, mas não altera as células dos pulmões e coração. Resultados preliminares mostram que a enzima BmooMPα-III induz uma drástica redução de células HeLa e é capaz de causar desfibrinogenação em camundongos, quando administrada i.p. Por esse motivo, é esperado que essa enzima possa ser de interesse médico, como um agente terapêutico no tratamento de desordens trombóticas e câncer.
Abstract: Proteolytic enzymes from bothrops venom are responsible for the majority of local and systemic effects observed during the envenomation. In this work we describe the purification and characterization of a novel metalloproteinase from Bothrops moojeni snake venom. The enzyme, denoted BmooMPα-III, was purified by a combination of ion exchange (DEAE Sephacel), molecular exclusion (Shepadex G-75) and affinity (HiTrap Chelating HP) chromatographies. BmooMPα-III enzyme represents about 0.75% of the crude venom and shows a single band with an apparent molecular mass of 26 kDa when analyzed by SDS-PAGE, under reducing conditions. BmooMPα-III cleaves first the Aα chain, then βγ, but does not hydrolyzes the γ chain of bovine fibrinogen. Inhibition of fibrinogenolytic activity by metal ion chelating agent such as EDTA allow classifies BmooMPα-III as a metalloprotease. The enzyme was inhibited by β-mercaptoethanol, however, inhibitors such as, aprotinin, leupeptin and PMSF did not Affect the fibrinogenolytic activity. The enzyme is inactive at high temperatures (≥ 60 ° C) and shows maximum activity at pH around 7.0 to 10.0. BmooMPα-III cause toxic effect on liver and kidney cells, but does not alter the cells of the lungs and heart. Preliminary results show that the enzyme BmooMPα-III induces a drastic reduction in HeLa cells and it is able to cause desfibrinating in mice when administered ip. Therefore, it is expected that this enzyme may be of medical importance as a therapeutic agent in the treatment of thrombotic disorders and cancer.
Keywords: Bothrops moojeni
Metaloprotease
BmooMPα-III
Citologia
Cobra - Veneno
Serpente peçonhenta
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biomédicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
Citation: SILVA, Thalita Kristhina Alves. BmooMPα-III : uma metaloprotease purificada da peçonha da serpente Bothrops moojeni. 2014. 292 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biomédicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12402
Issue Date: 28-Feb-2014
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