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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12402
Document type: | Dissertação |
Access type: | Acesso Aberto |
Title: | BmooMPα-III: uma metaloprotease purificada da peçonha da serpente Bothrops moojeni |
Author: | Silva, Thalita Kristhina Alves |
First Advisor: | Oliveira, Fábio de |
First member of the Committee: | Costa, Júnia de Oliveira |
Second member of the Committee: | Santos Filho, Norival Alves |
Summary: | As enzimas proteolíticas presentes nas peçonhas botrópicas são responsáveis pela maioria dos efeitos locais e sistêmicos observados durante o envenenamento. Nesse trabalho, descrevemos a purificação e a caracterização de uma nova metaloprotease da peçonha da serpente Bothrops moojeni. A enzima, denominada de BmooMPα-III, foi purificada pela combinação das cromatografias de troca iônica (DEAE Sephacel), exclusão molecular (Sephadex G-75) e afinidade (HiTrap Chelating HP). A enzima BmooMPα-III representa cerca de 0,75 % da peçonha total e apresenta banda única com uma massa molecular aparente de 26 kDa, quando analisada por SDS-PAGE, sob condições redutoras. BmooMPα-III cliva primeiro a cadeia A, depois a B, mas não hidrolisa a cadeia do fibrinogênio bovino. A inibição da atividade fibrinogenolítica por agente quelante de íons metálicos como EDTA permite classificá-la como uma metaloprotease. A enzima também foi inibida pelo -mercaptoetanol, entretanto, inibidores de proteases tais como benzamidina, aprotinina, PMSF e leupeptina não afetam esta atividade. A enzima é inativa em altas temperaturas ( 60 oC) e apresenta atividade máxima em pH em torno de 7,0 10,0. BmooMPα-III causa efeito tóxico sobre as células hepáticas e renais, mas não altera as células dos pulmões e coração. Resultados preliminares mostram que a enzima BmooMPα-III induz uma drástica redução de células HeLa e é capaz de causar desfibrinogenação em camundongos, quando administrada i.p. Por esse motivo, é esperado que essa enzima possa ser de interesse médico, como um agente terapêutico no tratamento de desordens trombóticas e câncer. |
Abstract: | Proteolytic enzymes from bothrops venom are responsible for the majority of local and systemic effects observed during the envenomation. In this work we describe the purification and characterization of a novel metalloproteinase from Bothrops moojeni snake venom. The enzyme, denoted BmooMPα-III, was purified by a combination of ion exchange (DEAE Sephacel), molecular exclusion (Shepadex G-75) and affinity (HiTrap Chelating HP) chromatographies. BmooMPα-III enzyme represents about 0.75% of the crude venom and shows a single band with an apparent molecular mass of 26 kDa when analyzed by SDS-PAGE, under reducing conditions. BmooMPα-III cleaves first the Aα chain, then βγ, but does not hydrolyzes the γ chain of bovine fibrinogen. Inhibition of fibrinogenolytic activity by metal ion chelating agent such as EDTA allow classifies BmooMPα-III as a metalloprotease. The enzyme was inhibited by β-mercaptoethanol, however, inhibitors such as, aprotinin, leupeptin and PMSF did not Affect the fibrinogenolytic activity. The enzyme is inactive at high temperatures (≥ 60 ° C) and shows maximum activity at pH around 7.0 to 10.0. BmooMPα-III cause toxic effect on liver and kidney cells, but does not alter the cells of the lungs and heart. Preliminary results show that the enzyme BmooMPα-III induces a drastic reduction in HeLa cells and it is able to cause desfibrinating in mice when administered ip. Therefore, it is expected that this enzyme may be of medical importance as a therapeutic agent in the treatment of thrombotic disorders and cancer. |
Keywords: | Bothrops moojeni Metaloprotease BmooMPα-III Citologia Cobra - Veneno Serpente peçonhenta |
Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR |
Language: | por |
Country: | BR |
Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
Institution Acronym: | UFU |
Department: | Ciências Biomédicas |
Program: | Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas |
Quote: | SILVA, Thalita Kristhina Alves. BmooMPα-III: uma metaloprotease purificada da peçonha da serpente Bothrops moojeni. 2014. 292 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biomédicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014. DOI https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.191 |
Document identifier: | https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.191 |
URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12402 |
Date of defense: | 28-Feb-2014 |
Appears in Collections: | DISSERTAÇÃO - Biologia Celular e Estrutural Aplicadas |
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