Publicação: Caracterização bioquímica e funcional de uma nova
Thrombin-like isolada da peçonha de Bothrops pauloensis
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Coorientador
Brandeburgo, Maria Inês Homsi
Resumo
Serinoproteases isoladas de peçonhas ofídicas têm um importante papel na
formação e dissolução de coágulos. Essas toxinas principalmente, as enzimas thrombinlike
afetam o sistema hemostático resultando em incoagulabilidade sanguínea. No
presente estudo, uma enzima thrombin-like nomeada Tl-Bp foi isolada de Bothrops
pauloensis e características bioquímicas, enzimáticas e farmacológicas foram
determinadas. Tl-Bp é uma glicoproteína que contém ambos, carboidratos N-ligados e
ácido siálico na estrutura, possui PM = 34 kDa sob condições redutoras e pI ~ 6,4. A
seqüência N-terminal da enzima (VIGGDECDINEHPFL) mostrou alta similaridade quando
comparada com outras toxinas thrombin-like isoladas de peçonhas ofídicas. Tl-Bp
mostrou alta atividade coagulante sobre os plasmas bovino e humano e foi inibida por
PMSF, benzamidina e leupeptina. Além disso, mostrou estabilidade quando examinadas
em diferentes temperaturas (- 70°C a 37°C), pHs (3 a 9) e presença de íons metálicos
divalentes (Ca2+, Mg2+, Zn2+ e Mn2+). Tl-Bp mostrou alta atividade catalítica sobre
substratos naturais como o fibrinogênio e sintético, tais como o TAME, S-2238 e S-2288,
além disso, mostrou atividade calicreína-like, mas foi incapaz de atuar sobre o S-2765 e
substrato da plasmina. A enzima não demonstrou atividade hemorrágica, miotóxica,
indução de edema e agregação plaquetária, assim como atividade proteolítica sobre a
caseína. Analisados juntos, nossos resultados mostram que Tl-Bp é uma nova isoforma
de enzima thrombin-like isolada da peçonha de Bothrops pauloensis.
Abstract
Serine proteinases isolated from snake venom have an important role in the
formation and dissolution of clots. These toxins primarily, the thrombin-like enzymes affect
the hemostatic system resulting in blood incoagulation. At present study, a thrombin-like
enzyme named Tl-Bp was isolated from Bothrops pauloensis snake venom and its
biochemical, enzymatic and pharmacological characteristics were determined. Tl-Bp is a
glycoprotein that contain both carbohydrates N-linked and sialic acid in its structure, has
Mr. = 34,000 at reducing conditions and pI ~ 6.4. The N-terminal sequence of the enzyme
(VIGGDECDINEHPFL) showed high similarity when compared with other thrombin-like
enzymes isolated from snake venoms. Tl-Bp showed high clotting activity upon bovine and
human plasma and was inhibited by PMSF, benzamidine and leupeptin. Moreover, showed
stability when examined at different temperatures (-70°C to 37°C), pHs (3 to 9) and
presence of divalent metal ions (Ca2+, Mg2+, Zn2+ and Mn2+). Tl-Bp showed high catalytic
activity upon natural substrates such as fibrinogen and synthetic, such as TAME, S-2238
and S-2288, moreover, showed kallikrein-like activity, but was unable to act upon S-2765
and plasmin substrate. The enzyme did not induce hemorrhage, myotoxicity, edema and
platelet aggregation as well as proteolytic activity upon casein. Take together, our data
show that Tl-Bp is a new thrombin-like enzyme isoform isolated from Bothrops pauloensis
snake venom.
Palavras-chave
Bothrops pauloensis, Peçonhas de serpentes, Coagulação, Atividade proteolítica, Enzimas thrombin-like, Snake venom, Blood coagulation, Proteolytic enzymes, Thrombin-like enzymes, Serpente peçonhenta - Peçonha, Bothrops
Citação
COSTA, Fábio Lucas Silva. Caracterização bioquímica e funcional de uma nova
Thrombin-like isolada da peçonha de Bothrops pauloensis. 2008. 88 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.