Publicação: Identificação de isoformas antigênicas de
Dermatophagoides pteronyssinus reconhecidas
por anticorpos IgE e IgG1 em pacientes atópicos e
não atópicos
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Orientador
Coorientador
Silva, Deise Aparecida de Oliveira
Resumo
O ácaro da poeira domiciliar Dermatophagoides pteronyssinus (Dp) é uma das principais fontes
de alérgenos intradomiciliar em todo o mundo, e por isto considerado importante na
sensibilização de indivíduos predispostos geneticamente. Alguns alérgenos deste ácaro
podem ocorrer como isoalérgenos diferenciando na sequência dos aminoácidos ou mesmo
no padrão de glicosilação, o que pode causar diferenças na sensibilização alergênica. O
objetivo do presente trabalho foi investigar novos antígenos imunodominantes com
potencial aplicabilidade no diagnóstico laboratorial e monitoramento de indivíduos atópicos
sob imunoterapia alérgeno-específica. Para isto, o extrato de Dp foi separado por eletroforese
bidimensional (2D) com subsequente immunoblotting para detecção de componentes ligantes
de IgE e IgG1 específica. O pool de soros testado no immunoblotting 2D foi escolhido a partir
de um painel de soros positivos a alérgenos de Dp determinados por immunoblotting 1D para
IgE e IgG1 específica em pacientes atópicos (A) e IgG1 em indivíduos não atópicos (NA),
grupos estes definidos por teste cutâneo de puntura (TCP) e níveis específicos de IgE e IgG1
determinados por ELISA. Os níveis de IgE a Dp bem como a soropositividade foram maiores
em atópicos (mediana IE = 3,8; 100%) do que em não atópicos (mediana IE = 0,7; 0%)
(P<0,0001), enquanto níveis de anticorpos IgG1 específicos a Dp não mostraram diferença
significante entre os grupos (mediana IE = 2,9; 84% vs mediana IE = 2,5; 86%). Os principais
alérgenos ligantes de IgE determinados por immunoblotting 1D foram as bandas de 15 kDa,
60 kDa e 103 kDa, enquanto os principais alérgenos ligantes de IgG1 foram as bandas >56
kDa. A eletroforese 2D do extrato de Dp mostrou uma resolução de mais de 70 spots na faixa
de ponto isoelétrico (pI) 3-10 e massa molecular 11-110 kDa. O immunoblotting 2D revelou
diferenças nos padrões de ligação de IgE e IgG1, com vários spots reconhecidos por
anticorpos IgE entre 15 e 103 kDa (pI 5,1-8,0). A reatividade de IgG1 no grupo A foi
observada principalmente aos spots mais fortemente reconhecidos na faixa de maior massa
molecular (70-103 kDa) e menor pI 5,1-6,6. Para a reatividade de IgG1 no grupo NA, os spots
mais fortemente reconhecidos foram observados entre 85-103 kDa (pI 5,1-5,8). Assim, a
eletroforese 2D com a subseqüente realização do immunoblotting permitiu a identificação de
isoalérgenos específicos reconhecidos por diferentes isotipos de anticorpos em atópicos e não
atópicos, o que pode contribuir de maneira relevante no desenvolvimento de potenciais
candidatos para uso em diagnóstico e também no monitoramento do níveis de IgE e IgG1
específicos de pacientes alérgicos sob imunoterapia.
Abstract
The house dust mite Dermatophagoides pteronyssinus (Dp) is a major source of indoor allergens
in the world and considered important for sensitization of genetically predisposed subjects.
Some allergens from this mite can occur as isoallergens with differences in amino acid
sequences or glycosylation, leading to differences in allergenic sensitization. The aim of this
study was to investigate new immunodominants antigens with potential application for the
laboratorial diagnosis and monitoring of atopic patients under allergen-specific
immunotherapy. Dp extract was separated by two-dimensional (2D) electrophoresis with
subsequent immunoblotting for determination of specific IgE and IgG1 binding components.
Pooled human sera tested in 2D immunoblotting were chosen from a panel of sera positive
to Dp allergens determined by 1D immunoblotting for specific IgE and IgG1 in atopic
patients (A) and IgG1 in non-atopic subjects (NA). Patients were selected by skin prick test
(SPT) and levels of specific IgE and IgG1 by ELISA. Levels of IgE to Dp and seropositivity
were higher in atopics (median EI = 3.8; 100%) than non-atopics (median EI = 0.7; 0%) (P <
0.0001), while levels of Dp-specific IgG1 showed no significant difference between the
groups (median EI = 2.9; 84% vs median EI = 2.5; 86%). The major IgE-binding components
determined by 1D immunoblotting were the 15 kDa, 60 kDa and 103 kDa bands, and the
major IgG1-binding allergens were bands >56 kDa. 2D gel electrophoresis of Dp extract
showed a resolution of more than 70 spots throughout the separation range of isoelectric
point (pI) 3-10 and molecular size of 11-110 kDa. 2D immunoblotting revealed differences in
IgE- and IgG1-binding patterns, with several spots recognized by IgE antibodies ranging
from 15 to 103 kDa and pI 5.1-8.0. For IgG1 reactivity in atopic patients, strongly recognized
spots were observed at ranges of higher molecular masses (70-103 kDa) and lower pI (5.1-
6.6). For IgG1 reactivity in non-atopic subjects, the most strongly recognized spots were
observed ranging from 85 to 103 kDa (pI 5.1-5.8). 2D electrophoresis with subsequent
immunoblotting allowed the identification of specific isoallergens recognized by different
antibody isotypes in atopic and non-atopic subjects. This information can be used to improve
the development of potential candidates for using in diagnostic as well as in monitoring of
the levels of specific IgE and IgG1 in atopic patients under immunotherapy.
Palavras-chave
Ácaro da poeira domiciliar, Dermatophagoides pteronyssinus, Immunoblotting bidimensional, Alergia, House dust mite, Two-dimensional immunoblotting, Allergy, Eletroforese bidimensional
Citação
MIRANDA, Juliana Silva. Identificação de isoformas antigênicas de
Dermatophagoides pteronyssinus reconhecidas
por anticorpos IgE e IgG1 em pacientes atópicos e
não atópicos. 2010. 87 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010.