Publicação: Purificação e caracterização de uma CA2+ -ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae)
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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CAPITULO III: Miosina pode ser precipitada pelo congelamento e descongelamento de fração
solúvel de diferentes tecidos de mamíferos. Nesse trabalho, o objetivo foi
precipitar ATPase similar à miosina a partir de fração solúvel de larva de P.
nucleorum. A fração solúvel foi congelada a -20 oC e descongelada após 48
horas. O precipitado foi recuperado por centrifugação a 45.000 g x 40 minutos e
foi lavado sucessivamente com solução tampão em pH 7,5 e 9,0. Posteriormente,
ATPase foi solubilizada pelo tratamento do precipitado com solução tampão pH
9,0 contendo 0,5 mol.L-1 de NaCl. Os principais polipeptídeos da fração ATPase
apresentaram Mr de 205 e 45 kDa. Essa fração expressou alta atividade Ca-
ATPase, mas não apresentou atividade Mg2+-ATPase e nem K+/EDTA-ATPase. A
atividade Ca2+-ATPase não foi inibida por tapsigargina 140 μ mmol.L-1, ouabaína
1,7 mmol.L-1 ou azida 1 mmol.L-1. A atividade foi sensivelmente inibida por
magnésio, mas praticamente não foi inibida por cobre ou zinco. A enzima não
hidrolisou AMP e nem PPi e hidrolisou muito pouco ADP e GTP. Nesse trabalho,
foi isolado um polipeptídeo de 205 kDa de larva de P. nucleorum, que co-purificou
com atividade Ca2+-ATPase.
Abstract
CHAPTER III: Myosin can be precipitated by freezing and thawing the soluble fraction of different
mammal tissues. In this work, the objective was to precipitate ATPase similar to
myosin starting from the soluble fraction of P. nucleorum larva. The soluble
fraction was frozen at -20 oC and thawed after 48 h and centrifuged at 45.000 g x
40 min. The precipitaded was recovered and successively washed with buffer
solution at pH 7.5 and 9.0. Later, ATPase was solubilized through the treatment of
the precipitate with buffer solution pH 9.0 containing 0.5 mmol.L-1 NaCl. The main
peptides of the ATPase fraction presented Mr of 205 and 45 kDa. That fraction
expressed high Ca2+-ATPase activity, but it did not present or K+/EDTA-ATPase
activity. However, Mg2+-ATPase activity appears in the presence of F-actin, and
identification by PMF shows similarity of p205 with myosin heavy chain of
Tribolium castaneum. The Ca2+-ATPase activity was not inhibited by 140 μmol.L-1
thapsigargin, 1.7 mmol.L-1 ouabain or 1 mmol.L-1 azide, but was greatly inhibited
by magnesium. The enzyme did not hydrolyze AMP or PPi and only slightly
hydrolyze ADP and GTP. In this work, we isolated a polypeptide from 205 kDa of
P. nucleorum larvae that was co-purified with Ca2+-ATPase activity.
Palavras-chave
Purificação, ATPase, Larva, Pachymerus, Purification, Larvae, Proteínas
Citação
MELO, Hugo Christiano Soares. Purificação e caracterização de uma CA2+ -ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae). 2008. 109 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.