Publicação: Métodos de isolamento de dna associado à nucleossomos em espermatozoide de touros
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA ANIMAL
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Resumo
Durante a espermatogênese a cromatina é reprogramada, onde a maioria dos nucleossomos são
substituídos por protaminas. Recentemente, foi descoberto que no genoma espermático existem
nucleossomos concentrados em regiões específicas. Porém ainda são necessárias informações
sobre essa preservação de nucleossomos em espermatozoide bovino. Metodologias usando
DTT, digestão com Nuclease Micrococcal e centrifugação para separar os fragmentos contendo
os nucleossomos já são realizadas com espermatozoide de mamíferos, porém alguns resultados
são questionáveis. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar métodos para
isolar DNA nucleossomal. Utilizou-se concentrações de Triton X 100 para permeabilizar
membranas e o DTT para descondensar a cromatina, Micrococcal e/ou sonicação para
fragmentar a cromatina e centrifugação ou imunopreciptação para isolar o DNA nucleossomal.
Os resultados indicam que a concentração de Triton X 100 a 3 % e 40 mM de DTT por 120
horas é o método mais eficiente para descondensar e permitir o acesso de macromoléculas na
cromatina espermática. A cromatina foi melhor fragmentada com Micrococcal associada a
sonicação e o método mais específico para capturar fragmentos de DNA nucleossomal foi o de
imunopreciptação com beads magnéticos.
Abstract
Palavras-chave
Cromatina, Histonas, Nucleossomo
Citação
BORGES, Sávio Ferreira. Métodos de isolamento de dna associado à nucleossomos em espermatozoide de touro. 2018. 23f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018.