Publicação: Papel do MHC de classe II na biogênese do vacúolo parasitóforo
de Leishmania amazonensis e seu impacto no curso da infecção in
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Silva, Cláudio Vieira da
Resumo
L. amazonensis são protozoários intracelulares obrigatórios, fagocitados por células de
defesa do hospedeiro mamífero e se multiplicam em compartimentos ligados a
membrana chamados de vacúolos parasitóforos (VP). Estes sofrem um processo de
maturação que inclui fusões com vesículas da via endocítica conferindo uma natureza
hibrida, induzindo a formação de vacúolos grandes que podem conter até 30
amastigotas. A biogênese do VP envolve aquisição de marcadores de membrana de
endossomos tardios, como LAMPs, Rab GTPases, catepsina, próton ATPases, e MHC
classe II. Nestes VPs as moléculas de MHC II se localizam no mesmo sitio de ligação
da forma amastigota de L. amazonensis, as quais são capazes de degradar essa molécula
dentro megassomo. Neste contexto, objetivamos verificar se a molécula de MHC II é
importante na biogênese do VP e se sua ausência afetaria o curso da infecção. Para isso
realizamos ensaios in vivo nos quais infectamos patas de camundongos C57BL/6
nocautes pra MHC II (mhcii -/-) e wild type (WT), e após 6 semanas de infecção,
coletamos baço, linfonodo poplíteo e pata para analise histopatológica, perfil de
citocinas e carga parasitária. Além disso, realizamos ensaio de multiplicação, nos
tempos de 72, 96 e 120 horas, com macrófagos peritoneais de camundongos mhcii-/- e
WT infectando-os via intraperitoneal, com a forma amastigota de L. amazonensis. Os
resultados da análise histológica mostraram que os animais mhcii-/- infectados não
apresentaram diferença significativa em relação aos animais WT. Em relação a
produção de citocinas, os resultados mostraram aumento na produção das citocinas IL-4
e IL-12 nos animais mhcii-/- e aumento mais significativo na produção de IFN-γ nos
animais WT, havendo ainda redução de TNF-α nos dois grupos analisados. Já no ensaio
de multiplicação com macrófagos peritoneais houve diminuição na área do vacúolo
parasitóforo e menor carga parasitária nos animais mhcii-/- em comparação aos animais
WT. Portanto, o processo de colocalização das moléculas de MHC II na membrana do
VP parece não ser apenas um mecanismo de subversão do parasita, visto que na
ausência desta molécula houve diminuição altamente significativa da área do VP e
menor carga parasitária, caracterizando menor progressão da doença em comparação
aos animais WT. Assim, acreditamos que a molécula de MHC II pode ter também um
importante papel na biogênese deste VP.
Abstract
L. amazonensis are obligate intracellular protozoan, engulfed by host immune cells and
multiply in membrane-bound compartments called parasitophorous vacuole (PV). These
undergo a maturation process that includes the endocytic vesicles fusions conferring via
a hybrid nature, inducing the formation of large vacuoles which may contain up to 30
amastigotes. The VP biogenesis involves acquisition of late endosomes membrane
markers as lamps, Rab GTPases, cathepsin, proton ATPases, and MHC class II. In these
VPs MHC II molecules are located in the same binding site of L.
amazonensis amastigotes, which are able to degrade this molecule in megassomos. In
this context, we aimed to verify whether the MHC II molecule is important in the VP
biogenesis and his absence would affect the course of infection. For this we
performed in vivo assays in which we infect Paws of MHC II (mhcii-/-) knockouts and
wild type (WT) C57BL / 6, and after 6 weeks of infection, we collected spleen, popliteal
lymph node and paw for histopathological analysis, cytokine profile and parasitic load.
In addition, we made a multiplication assay, in times of 72, 96 and 120 hours, with
peritoneal macrophages of mice mhcii-/- and WT infecting them via intraperitoneal, with
amastigotes of L. amazonensis. The results of the histological analysis showed that
infected animals mhcii-/- showed no significant difference compared to WT mice.
Regarding cytokine production, the results showed increased production of IL -4 and IL
-12 in mhcii-/- animal and more significant increase in IFN-γ in WT animals, even with a
reduction of TNF- α in two groups analyzed. In the proliferation assay with peritoneal
macrophages, it was observed decreased in the parasitophorous vacuole area and lower
parasite load in mhcii-/- animals compared to WT mice. Therefore , the process of
colocalization of MHC II molecules on the membrane of the VP seems to be not only a
mechanism of subversion of the parasite , whereas in the absence of this molecule was
highly significant decrease in the VP area and lower parasite load , featuring less
progression of disease compared to WT mice. Thus, we believe that the MHC II
molecule may also play a role in the biogenesis of the VP.
Palavras-chave
Leishmania amazonensis, Vacúolo parasitóforo, Molécula MHC classe
II, Parasitophorous vacuole, MHC class II molecule
Citação
SILVA, Fabiana. Papel do MHC de classe II na biogênese do vacúolo parasitóforo
de Leishmania amazonensis e seu impacto no curso da infecção in
vivo. 2014. 65 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014. DOI https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.332