Publicação: Construção de uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais
apresentados em fagos e seleção de clone neutralizante de toxinas
presentes na peçonha de Bothrops pauloensis
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Resumo
Metaloproteinases são enzimas hidrolíticas do tipo endopeptidases que
dependem da ligação de um metal, geralmente, o zinco, em seu sítio catalítico
para manifestação de suas atividades. Estas enzimas são os principais
componentes de peçonhas botrópicas responsáveis por seus efeitos
hemorrágicos. Neste estudo foi construída uma biblioteca de fragmentos de
anticorpos recombinantes, derivados de galinhas imunizadas com peçonha bruta
de Bothrops pauloensis. A biblioteca foi utilizada para selecionar fagos
expressando scFvs ligantes a toxinas presentes na peçonha, e para expressão,
puricação e identificação de anticorpos capazes de inibir diversas atividades
tóxicas causadas pela peçonhas de B. pauloensis. Por meio de ensaios biológicos
e enzimáticos, constatou-se a capacidade da molécula scFv (C5) em inibir as
ações hemorrágica e fibrinogenolítica da peçonha bruta e de uma metaloprotease
isolada (Neuwiedase) da mesma peçonha.
Abstract
Metalloproteinases are hydrolytic endopeptidase-like enzymes that depend
on the ligation of a metal íon, such as zinc, in the catalytic site for its activity.
These enzymes are the main components of bothropic venoms that are
responsible for the typical hemorrhagic effect. In this study, we have constructed a
combinatorial library of scFv monoclonal antibodies derived from immunized
chickens with crude venom of Bothrops pauloensis. The scFv library was
screened for ligands to the toxins of the crude venom in order to identify antibodies
that were able to inhibit the toxic activities caused by B. pauloensis venoms.
Biological and enzymatic assays demonstrated that one scFv clone was able to
inhibit the hemorrhagic and fibrinogenolytic activities of the crude venom and of an
isolated metaloprotease (Neuwiedase).
Palavras-chave
ScFv, Metaloprotease, Peçonha botrópica, Hemorragia, Phage display, Metalloprotease, Bothropic venom, Hemorrhagyc, Genética molecular, Cobra venenosa - Veneno, Anticorpos monoclonais
Citação
CARDOSO, Rone. Construção de uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais
apresentados em fagos e seleção de clone neutralizante de toxinas
presentes na peçonha de Bothrops pauloensis. 2008. 131 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.