Publicação: Diagnóstico molecular da hanseníase com biomarcadores ML0024 e 85B
pela PCR em tempo real
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CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
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Hanseníase é uma doença espectral, causada pelo Mycobacterium leprae, cujo
diagnóstico é clínico-laboratorial, realizado por meio de técnicas baciloscópicas de baixa
sensibilidade e especificidade, que não detectam o bacilo nas formas paucibacilares
(PB). No presente estudo foram testados marcadores moleculares por qPCR, com a
finalidade de auxiliar o diagnóstico da doença, principalmente na forma PB. O DNA total
de biópsia de lesão de pele foi extraído de 185 pacientes virgens de tratamento. A qPCR
foi realizada utilizando pares de primers para amplificação da sequência ML0024 e 85B
do genoma do bacilo. Ambos marcadores foram altamente específicos. A detecção do
DNA do bacilo pela qPCR ML0024 e qPCR 85B foi 59,45% (110/185) e 57,29%
(106/085), respectivamente, enquanto o Índice Baciloscópico (IB) de esfregaço dérmico
e de lesão de pele detectaram, respectivamente, a presença do bacilo em 45,94%
(85/185) e 44,86% (83/185) dos casos. Dentre todos os casos negativos para o IB de
esfregaço dérmico, a qPCR ML0024 e qPCR 85B detectaram a presença do DNA do
bacilo em 26,00% (26/100) e 23,00% (23/100), respectivamente. Entre aqueles negativos
para o IB de lesão de pele, a qPCR ML0024 foi positiva em 27,45% (28/102) e a qPCR
85B em 23,52% (24/102). Observou-se diferença significativa entre a positividade dos
testes moleculares e os dois testes baciloscópicos (p<0,0001) para as formas clínicas T,
DT- e DT+. A concordância entre os resultados da qPCR ML0024 e qPCR 85B foi
superior a 90,00% e apresentou excelente replicabilidade. Entre os testes baciloscópicos
e os testes moleculares as concordâncias observadas foram superiores a 80,00%.
Quanto à análise quantitativa, observou-se correlação positiva entre as formas clínicas e
a carga bacilar. Os marcadores moleculares avaliados neste estudo possuem igualmente o mesmo número de cópias no genoma, são específicos, apresentam
praticamente o mesmo tamanho de amplicon e possuem comportamentos semelhantes,
embora não apresentando diferenças significativas na sensibilidade. Portanto, esse
trabalho vem corroborar com a classificação de Ridley-Jopling (1966) mostrando a
presença de DNA do M. leprae em amostras cujos testes baciloscópicos foram
negativos; correlacionando-se diretamente com a carga bacilar de cada forma clínica do
espectro da doença, ampliando o diagnóstico de certeza na hanseníase.
Abstract
Leprosy is a spectral disease caused by Mycobacterium leprae, whose clinical and
laboratory diagnosis is performed by means of sputum smear techniques of low
sensitivity and specificity, they do not detect the bacilli in paucibacillary (PB). In the
present study were tested by qPCR molecular markers, in order to assist the diagnosis of
disease, mainly in the form PB. The total DNA of skin lesion biopsy was taken from 185
treatment-naïve patients. The qPCR was performed using primer pairs for amplification of
the sequence ML0024 and 85B of the genome of the bacillus. Both markers were highly
specific. Detection of DNA of the bacillus by qPCR and qPCR ML0024 85B was 59.45%
(110/185) and 57.29% (106/085), respectively, while the bacterial index (BI) smear and
dermal skin lesion detected, respectively, the presence of the bacillus in 45.94% (85/185)
and 44.86% (83/185) of cases. Among all cases negative for the IB dermal smear, the
qPCR and qPCR ML0024 85B detected the presence of the bacillus DNA in 26.00%
(26/100) and 23.00% (23/100), respectively. Among those negative for the IB skin
lesions, the ML0024 qPCR was positive in 27.45% (28/102) and qPCR 85B in 23.52%
(24/102). There was significant difference between positive molecular tests and two tests
bacilloscopic (p <0.0001) for the clinical forms of T, and DT-DT +. The agreement
between the results of qPCR and qPCR ML0024 85B was more than 90.00% and
showed excellent repeatability. Among the tests and molecular tests bacilloscopic the
concordance observed were higher than 80.00%. As for the quantitative analysis, we
observed a positive correlation between the clinical forms and bacillary load. Molecular
markers evaluated in this study also have the same number of copies in the genome, are
specific, have virtually the same amplicon size and have similar behavior, although with significant differences in sensitivity. Therefore, this study corroborates with the Ridley-
Jopling classification (1966) showing the presence of DNA of M. leprae in samples
bacilloscopic whose tests were negative, correlating directly with the bacterial load of
each clinical spectrum of disease, increasing certainty in the diagnosis of leprosy.
Palavras-chave
Hanseníase, Mycobacterium leprae, Pele, PCR em tempo real, Paciente, Leprosy, Skin, Real time PCR, Patient, Imunohistoquímica, Imunologia, Pele - Doenças
Citação
FIGUEIRA, Márcia Moura Nunes Rocha. Diagnóstico molecular da hanseníase com biomarcadores ML0024 e 85B
pela PCR em tempo real. 2010. 80 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010.