Publicação: Expressão heteróloga de abaecina de
Apis mellifera em Pichia pastoris
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Resumo
CAPITULO 2: Peptídeos antimicrobianos (AMPs) fazem parte da defesa imune que os
insetos apresentam para proteção contra patógenos. Nesse trabalho foi feito a
expressão do peptídeo antimicrobiano abaecina do himenóptero Apis mellifera
em levedura Pichia pastoris. Foi desenhado um gene contendo elementos para
clonagem, purificação e término de tradução baseado na sequência de
abaecina de Apis mellifera seguido de otimização de códons e posterior síntese
química do gene. Esse gene foi clonado em pUC57 e após sequenciamento
para confirmação, o inserto foi subclonado em vetor de expressão pPIC9 e
transformado em Pichia pastoris. Após seleção de clones positivos, a
expressão foi induzida por adição de metanol. O sobrenadante foi analisado em
diferentes tempos para determinação do tempo ótimo de produção do peptídeo
recombinante. A análise da atividade inibitória de crescimento mostrou que
houve inibição significativa do crescimento da bactéria Escherichia coli no
tempo de 24 hora nas concentrações de 10 e 25 μg de peptídeo. Os resultados
mostram que o peptídeo abaecina de Apis mellifera produzido em Pichia
pastoris tem atividade antimicrobiana.
Abstract
CHAPTER 2: Antimicrobial peptides (AMPs) are part of the immune defense that
insects have developed to protection hymnoptera against pathogens. This work
was done the expression of antimicrobial peptide Abaecina of Apis mellifera in
fungi Pichia pastoris. A gene containing elements for cloning, purification and
termination of translation was designed based on the sequence of Apis mellifera
abaecina then was optimization of codons and subsequent chemical synthesis
of the gene. This gene was cloned into pUC57 and after sequencement for
confirmation, then the insert was subcloned into expression vector pPIC9 and
realized the transformation into Pichia pastoris. After selection of positive clones
expression was induced by adding methanol. The supernatant was analyzed at
different times to determine the optimum time of production of the recombinant
peptide. The growth inhibition test showed that there was significant inhibition of
growth of the bacterium Escherichia coli DH5α in time of 24 hours at
concentrations of 10 and 25 mg of peptide. The results showed that the peptide
abaecina of Apis mellifera produced in Pichia pastoris has antimicrobial activity.
Palavras-chave
Abaecina, Pichia pastoris, Apis mellifera, Expressão heteróloga, Abaecin, Heterologous expression, Abelha - Genética
Citação
LUIZ, Denis Prudêncio. Expressão heteróloga de abaecina de
Apis mellifera em Pichia pastoris. 2011. 41 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2011. DOI https://doi.org/10.14393/ufu.di.2011.60