Publicação: Mapeamento de epitopos funcionais do receptor CD14 por Phage
Display e o reconhecimento de componentes bacterianos
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Resumo
O antígeno de diferenciação 14 é uma molécula chave da imunidade inata. É um
receptor de reconhecimento padrão que reconhece principalmente
lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico e ácido araquidônico, após este
reconhecimento a indução da liberação de diversas citocinas como um
mecanismo de defesa do sistema imunológico. Diversos estudos sugerem
diferentes epítopos da região N-Terminal da molécula como sítios de
reconhecimento ao LPS, no entanto, resultados contraditórios sobre a sequência
de reconhecimento ainda persistem. Neste trabalho, epítopos funcionais da
molécula CD14 foram mapeadas através da técnica de Phage Display utilizando
anticorpos anti-CD14 comerciais e uma biblioteca de peptídeos Ph.D-C7C
expressa na superfície de fagos filamentosos M13. Análises in silico e funcionais
foram realizadas para mapear os peptídeos selecionados na estrutura 3D do
CD14 e verificar a imunoreatividade dos peptídeos contra componentes
bacterianos (bactéria gram-positivas e gram-negativas). Os peptídeos
selecionados reagiram fortemente contra diferentes bactérias, além do o
reconhecimento da região amino terminal do CD14, foi demonstrado uma
segunda região no meio do receptor com a capacidade de ligação a componentes
bacterianos. Adicional análise in silico sugeriram um possível papel dos epítopos
do CD14 como peptídeos antimicrobianos naturais.
Abstract
The cluster of differentiation antigen 14 (CD14) is a key molecule of the innate
immunity. This pattern recognition receptor binds mainly to lipopolysaccharide
(LPS), lipotechoic acid, arachidonic acid and thus induces the releases various
cytokines as a defense mechanism. Several studies suggest that different regions
of the amino-terminal portion of the molecule may be involved in the LPS binding;
however, controversial results on the recognition sequence still persist. In this
work, functional epitopes of the CD14 molecule were mapped through Phage
Display by using a 7-mer conformational constrained random peptide library
against a monoclonal antibody anti-soluble CD14-fraction ST and a polyclonal
anti-CD14. In silico and empirical analyzes were performed to map the selected
peptides into the CD14 3D structure. Immunoreactivity tests of peptides against
bacterial components of Gram+ and Gram- bacteria were performed in order to
demonstrate their functional recognition. All peptides strongly reacted against all
bacteria, and besides the recongtion of the amino-terminal region, we were able to
demonstrate a second epitope site in the middle of the receptor. Additional in silico
analysis suggests a possible role of CD14 epitopes as natural antimicrobial
peptides.
Palavras-chave
CD14, Mapeamento de epítopos, Receptor de LPS, Phage
display, Epitope mapping, LPS receptor, Epítopos
Citação
ALVES, Patrícia Terra. Mapeamento de epitopos funcionais do receptor CD14 por Phage
Display e o reconhecimento de componentes bacterianos. 2013. 68 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2013.