Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/31888
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.creatorMota, Kelem Cristina Pereira-
dc.date.accessioned2021-06-08T11:42:32Z-
dc.date.available2021-06-08T11:42:32Z-
dc.date.issued2020-06-29-
dc.identifier.citationMOTA, Kelem Cristina Pereira. Glicosilfosfatidilinositol como alvo terapêutico e vacinal contra doenças parasitárias intracelulares. 2020. 123 f. Tese (Doutorado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.5506.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufu.br/handle/123456789/31888-
dc.description.abstractGlycosylphosphatidylinositol (GPI) is a glycolipid complex that anchors several proteins and glycoproteins to the cell membrane, considered an essential molecule for the interaction of several protozoa with their hosts. Parasite resistance is attributed to individuals with high anti-GPI antibody titers. Thus, the objectives of this study were to develop antibodies of single-chain variable fragments (scFv) selected by Phage Display against GPI of Plasmodium falciparum and to evaluate their ability to decrease the mortality of mice with cerebral malaria, as well as to neutralize parasitic cell invasion of broad intracellular protozoa. The success of the primary goal also led us to the development of scFv-binding peptides with greater affinity for GPI. The selection of P. falciparum GPI-binding scFv was performed from a Phage Display library containing an approximate diversity of 2x106 scFv combinatorial sequences. The expression and specificity of clones were analyzed by ELISA. The DNA extracted from the highest reactivity clone was subjected to sequencing and subsequent analysis of bioinformatics, with molecular modeling to predict the three-dimensional structure, as well as the complementarity determining regions (CDRs) and frameworks (FWRs). C57BL / 6 mice infected with P. berghei-ANKA were treated with the scFv clone and analyzes of parasitemia and mortality curve of the animals were performed. The reactivity of scFv with extracts of P. falciparum, Toxoplasma gondii and Trypanosoma cruzi was also evaluated, as well as its ability to prevent cell invasion. Finally, a new biopanning process was performed by Phage Display to select mimetic peptides to the GPI molecule of P. falciparum. The reactivity of phage-fused peptide clones with the selected scFv was evaluated by Phage-Elisa, and the most reactive clones were validated in the presence of serum from mice with cerebral malaria. Among selected scFv clones, eight (G1-G8) presented different sequences, and the expressed scFv G7 had the highest affinity to the P. falciparum GPI. G7 decreased the parasitemia of the animals and was able to protect animals from symptoms of cerebral malaria, significantly impacting survival. The G7 clone also presented high affinity for T. cruzi and T. gondii extracts, besides not being toxic to cells or to the parasites. After in vitro treatment, we have observed a reduction of parasites internalization when compared to the control group. Regarding the selection of mimetic peptides to GPI, 11 clones (F1, E1, F2, D2, C4, E4, D5, H5, A6, H6 and F7) presented different sequences, four of which (F1, E1, F2 and A6) were more reactive to G7, of which two (E1 and F1) distinguished serum from mice with malaria from the healthy ones. In summary, the broad spectrum GPI scFv G7 antibody presents great potential as a promising immunobiological drug that may be applied to the treatment of parasitic diseases, such as malaria, toxoplasmosis and Chagas disease. In addition, its binding peptides, mimetic to GPI, may also have theranostic potential, by acting in the near future both in diagnosis and as vaccine antigens.pt_BR
dc.description.sponsorshipCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorpt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Uberlândiapt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectGlicosilfosfatidilinositolpt_BR
dc.subjectscFvpt_BR
dc.subjectPeptídeos miméticospt_BR
dc.subjectPlasmodium falciparumpt_BR
dc.subjectToxoplasma gondiipt_BR
dc.subjectTrypanosoma cruzipt_BR
dc.subjectGlycosylphosphatidylinositolpt_BR
dc.subjectMimetic peptidespt_BR
dc.titleGlicosilfosfatidilinositol como alvo terapêutico e vacinal contra doenças parasitárias intracelularespt_BR
dc.title.alternativeGlycosylphosphatidylinositol as a therapeutic and vaccine target against intracellular parasitic diseasespt_BR
dc.typeTesept_BR
dc.contributor.advisor-co1Santos, Fabiana de Almeida Araújo-
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5310196853446603pt_BR
dc.contributor.advisor1Goulart Filho, Luiz Ricardo-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6759395798493082pt_BR
dc.contributor.referee1Lima, Wania Rezende-
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2445754830036281pt_BR
dc.contributor.referee2Levenhagen, Marcelo Arantes-
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/6541503470258321pt_BR
dc.contributor.referee3Ribeiro, Vanessa da Silva-
dc.contributor.referee3Latteshttp://lattes.cnpq.br/4600041017794225pt_BR
dc.contributor.referee4Silva, Murilo Vieira da-
dc.contributor.referee4Latteshttp://lattes.cnpq.br/8828671886211923pt_BR
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/1265229036188021pt_BR
dc.description.degreenameTese (Doutorado)pt_BR
dc.description.resumoGlicosilfosfatidilinositol (GPI) é um complexo glicolipídico que ancora diversas proteínas e glicoproteínas à membrana celular, considerada essencial para a interação de diversos protozoários com seus hospedeiros. Atribui-se a resistência a parasitos aos indivíduos com altos títulos de anticorpos anti-GPI. Assim, os objetivos deste estudo foram desenvolver anticorpos de fragmento variável de cadeia única (scFv) selecionados por Phage Display contra GPI de Plasmodium falciparum e avaliar a capacidade em diminuir a mortalidade de camundongos com malária cerebral, bem como neutralizar a invasão celular de parasitos protozoários intracelulares. O sucesso do objetivo primário também levou ao desenvolvimento de peptídeos ligantes ao scFv com maior afinidade ao GPI. A seleção de scFv ligante à GPI de P. falciparum foi realizada a partir de uma biblioteca de Phage Display contendo uma diversidade aproximada de 2x106 sequências combinatórias de scFv. A expressão e especificidade dos clones foram analisadas por ELISA. O DNA extraído do clone com maior reatividade foi submetido ao sequenciamento e posterior análise de bioinformática, com modelagem molecular para predizer a estrutura tridimensional, bem como as regiões determinantes de complementariedade (CDRs) e frameworks (FWRs). Camundongos C57BL/6 infectados com P. berghei- cepa ANKA foram tratados com o clone de scFv e análises de parasitemia e curva de mortalidade dos animais foram realizadas. Avaliou-se ainda a reatividade do scFv com extratos de P. falciparum, Toxoplasma gondii e Trypanosoma cruzi, bem como sua capacidade de impedir a invasão celular. Por fim, foi realizado um novo processo de biopanning por Phage Display para selecionar peptídeos miméticos à molécula GPI de P. falciparum. A reatividade dos clones de peptídeos fusionados aos fagos com o scFv selecionado foi avaliada por Phage-ELISA, e os clones mais reativos foram validados na presença de soro de camundongos com malária cerebral. Dentre os clones de scFv selecionados, oito (G1-G8) apresentaram sequência distintas, e expressaram scFv (G7) que se ligou com maior afinidade à GPI de P. falciparum. O clone G7 diminuiu a parasitemia dos animais e foi capaz de protegê-los dos sintomas de malária cerebral, impactando significativamente na sobrevivência. O clone G7 também apresenta alta afinidade por T. cruzi e T. gondii, além de não ser tóxico para a célula nem para o parasito. Após o tratamento in vitro houve menos internalização de parasitos quando comparado ao grupo controle. Quanto à seleção de peptídeos miméticos à GPI, 11 clones (F1, E1, F2, D2, C4, E4, D5, H5, A6, H6 e F7) apresentaram sequências distintas, sendo que quatro (F1, E1, F2 e A6) foram mais reativos ao G7, dos quais dois (E1 e F1) distinguem soro de camundongos com malária dos saudáveis. Em resumo, o scFv-G7 ligante de GPI de amplo espectro foi selecionado apresenta grande potencial como um promissor imunobiológico aplicado ao tratamento de doenças parasitárias, como malária, toxoplasmose e doença de Chagas. Adicionalmente, seus peptídeos ligantes, miméticos à GPI, também apresentam potencial teranóstico, podendo atuar no futuro próximo tanto no diagnóstico quanto como antígenos vacinais.pt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadaspt_BR
dc.sizeorduration123pt_BR
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOGENETICApt_BR
dc.identifier.doihttp://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.5506pt_BR
dc.orcid.putcode95210813-
dc.crossref.doibatchidc80afe6f-2cd2-4890-bf03-e337f9634027-
dc.subject.autorizadoTrypanosoma cruzipt_BR
dc.subject.autorizadoToxoplasma gondiipt_BR
dc.subject.autorizadoGlicosilfosfatidilinositolpt_BR
dc.description.embargo2022-07-29-
Appears in Collections:TESE - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
GlicosilfosfatidilinositolAlvoTerapeutico.pdfTese3.24 MBAdobe PDFThumbnail
View/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.