Publicação: Fracionamento da peçonha da serpente Bothrops alternatus e determinação de suas atividades biológicas e enzimáticas
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
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Resumo
As serpentes pertencentes ao gênero Bothrops são encontradas em todo o território
nacional, sendo responsáveis pela maioria dos acidentes ofídicos notiticados
anualmente ao Ministério da Saúde. Os acidentes provocados por serpentes botrópicas
caracterizam-se por efeitos locais e sistêmicos. A maioria das toxinas responsáveis por
estes efeitos são enzimas que podem apresentar atividades proteolítica, hemorrágica,
fosfolipásica A2, dentre outras. O presente trabalho teve como objetivo o fracionamento
da peçonha bruta de Bothrops alternatus e delineamento das atividades proteolítica,
hemorrágica e fosfolipásica A2 das frações obtidas. A peçonha bruta de B. alternatus foi
submetida a uma única etapa cromatográfica utilizando-se as seguintes resinas de
troca iônica : 1º - CM Sephadex C-25 (50 mg de peçonha bruta-PB, tampão acetato de
amônio, 0.05 M, pH 5,0); 2º —DEAE Sephadex A—25 (100 mg de PB, tampão bicarbonato
de amônio (AMBlC), 0,05M, pH 7,8); e 3º -DEAE Sephacel (200 mg de PB, tampão
AMBIC,0,05 M, pH7,8). O primeiro fracionamento resultou em apenas um pico principal,
com uma recuperação protéica final de somente 14,61%. No segundo e terceiro
fracionamentos foram obtidas 8 frações, designadas de 01 a 08 e A1 a A8, com
recuperação protéica de 26,5% e 50,31%, respectivamente. A atividade proteolítica foi
realizada, utilizando o
tibrinogênio bovino e a caseína como substratos. Nos dois
últimos fracionamentos todas as frações obtidas apresentaram atividade proteolítica
sobre o fibrinogênio bovino, exceto A7 e A8. A atividade caseinolítica também foi
encontrada na maioria das frações, exceto em D7, A7 e A8. A presença de toxinas
hemorrágicas foi verificada, por meio da inoculação subcutânea das amostras, no dorso
de camundongos machos. Esta atividade foi evidenciada nas frações D4, D5, D7, A3, A4 e A7,onde as frações D5,
D7 e A7 apresentaram halos hemorrágicos mais evidentes. A atividade PLAg foi
determinada por titulação potenciométrica, utilizando como substrato emulsão aquosa
de gema de ovo. A atividade PLAZ foi encontrada apenas na PB , estando ausente em
todas as frações isoladas. Não foi realizada nenhuma atividade para as frações obtidas
a partir do fracionamento com a resina CM Sephadex C-25. Os resultados obtidos
neste trabalho nos permitiram verificar que a resina DEAE Sephacel é mais eficiente
para separar os componentes da PB de B. alternatus. Também foi evidenciado que a
PB de B. alternatus é muito rica em enzimas proteolíticas. No entanto, os fatores
responsáveis pela ausência da atividade fosfolipásica A; não foram determinados,
sendo necessário novos estudos visando a identificação das fosfolipases A2 ativas
presentes na peçonha desta serpente.
Abstract
Palavras-chave
Bothrops alternatus, Peçonha, Atividade biológica
Citação
BALDO,Cristiani. Fracionamento da peçonha da serpente Bothrops alternatus e determinação de suas atividades biológicas e enzimáticas. 48 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2001.