Publicação: Influência da heparina na invasão de células de retina por Toxoplasma
gondii
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Resumo
O objetivo deste estudo foi determinar, em modelo in vitro, a influência de heparina na
susceptibilidade de células da retina à infecção por Toxoplasma gondii. Culturas primárias
de retina de embrião de galinha de 8 e 11 dias (E8 e E11) e de astrócitos da cabeça do
nervo óptico humano foram mantidas em lamínulas durante aproximadamente uma
semana, quando foram infectadas com taquizoítas de T. gondii por 24 horas. Fibroblastos
de embrião de galinha e fibroblastos de prepúcio humano foram usados como controle.
Parasitos foram pré-tratados com heparina e anticorpos anti-SAG-1, enquanto astrócitos
humanos foram estimulados com IFN-y antes e após a infecção, sendo realizada dosagem
de nitritos no sobrenadante destas células. As taxas de infecção (invasão), o índice global
de infecção (invasão) e as taxas de replicação celular, foram determinados pela contagem
de, no mínimo, 100 células por condição experimental. Anticorpo monoclonal antiheparina
foi utilizado para determinar a distribuição de heparina na superfície das células.
Pré-tratamento com heparina diminuiu o número de células E8 infectadas, porém,
aumentou as taxas de replicação intracelular do parasito nos astrócitos humanos. A
marcação para heparina foi discreta na maioria dos fibroblastos de embrião de galinha
enquanto que, na cultura de retina, a grande maioria das células apresentou forte marcação.
Astrócitos estimulados com IFN-y mostraram aumento significativo no índice global de
infecção, mas houve produção de nitritos somente em níveis basais nas células
estimuladas. Células de retina E8 e astrócitos humanos foram mais susceptíveis à infecção
por T. gondii que fibroblastos possivelmente pela distribuição diferencial de heparina na
superfície dessas células facilitando a invasão pelo T. gondii. A inibição da replicação de
T. gondii por IFN-y em astrócitos humanos parece ser independente de mecanismos
envolvendo a produção de nitritos.
Abstract
The purpose of this work was to analyze, in an in vitro model, the influence of the heparin
on the susceptibility of retinal cells to infection by Toxoplasma gondii. Primary cultures of
retinas from chick embryos of 8 and 11 days-old and astrocytes from human optic nerve
heads were maintained in coverslips for one week, when were infected with T. gondii
tachyzoites for 24 hours. Chick embryo and human foreskin fibroblasts were used as
controls for chick and human experiments, respectively. Parasites were pre-treated with
heparin and anti-T. gondii surface antigen 1 (SAG-1) antibody and the astrocytes were
stimulated with interferon gamma (IFN-y) before ante after infection. The number of cells
infected with T. gondii and the number of parasites per cell were determined by counting at
least 100 cells in each experimental condition. Monoclonal anti-heparin antibody was used
to determine the distribution of heparin on the surface of cells. Pre-treatment with heparin
increased the rates of replication E8 cells, while, in human astrocytes heparin pre-treatment
decreased intracellular parasite replication. The labeling for heparin was more discrete in
the chick embryo fibroblasts, while in the retinal cells there was strong labeling. Astrocytes
stimulated with IFN-y showed a little difference in the rates of infection and there was no
detectable nitric oxide (NO) production in the stimulated cells. Retinal cells of chick
embryos (E8) were more susceptible to infection by T. gondii than fibroblasts possible by
differential distribution of heparin on the surface of these cells, which may facilitate
adhesion and invasion by T. gondii. The inhibition of the replication of T. gondii by IFN-y
in human astrocytes probably is independent from mechanisms involving NO production.
Palavras-chave
Células da retina, Astrócitos, Heparina, Toxoplasma gondii, Retinal cells, Astrocytes, Heparin, Toxoplasmose
Citação
MASTRANTONIO, Eneida César. Influência da heparina na invasão de células de retina por Toxoplasma
gondii. 2007. 60 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2007.