Publicação: Imunização de camundongos com antígenos de lisado total (NLA) e
de excreção-secreção (NcESA) de Neospora caninum associados com
oligodeoxinucleotídeo CpG como adjuvante
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Orientador
Coorientador
Mineo, Jose Roberto
Resumo
Neospora caninum é um protozoário do filo Apicomplexa que causa doenças
neuromusculares em cães e abortos em bovinos, acarretando significativas perdas
econômicas. Estudos em modelos murinos têm contribuído para caracterizar novos
antígenos e estratégias para procedimentos de vacinação. Oligodeoxinucleotídeos
(ODN) com seqüências CpG são considerados potentes imunoadjuvantes para vários
patógenos, mas há limitada informação sobre sua utilização em vacinação contra
neosporose. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de antígenos de lisado total
(NLA) e de excreção-secreção (NcESA) de N. caninum combinados com ODN-CpG na
indução de resposta imune e proteção contra infecção por N. caninum em camundongos.
Seis grupos de camundongos C57BL6 foram imunizados subcutaneamente com NLA,
NLA+CpG, NcESA, NcESA+CpG, CpG (controle do adjuvante) ou PBS (controle da
infecção), com três reforços em intervalos de 2 semanas. Análises sorológicas
mostraram aumento na resposta de IgG2a anti-N. caninum em grupos de animais
imunizados com qualquer antígeno combinado com adjuvante CpG e níveis elevados do
isotipo IgG1 naqueles grupos contendo somente antígenos. Respostas proliferativas
após estimulação antigênica in vitro foram mais elevadas nos grupos imunizados com
antígenos associados com CpG, com alta produção de IL-12, mas camundongos
imunizados com NcESA ou NcESA+CpG exibiram maiores níveis de IFN-g e elevada
razão IFN-g/IL-10. Após desafio com 2 x 107 taquizoítas de N. caninum, camundongos
vacinados com NLA+CpG ou NLA apresentaram os mais baixos escores de morbidade
e alterações de peso corporal em comparação aos outros grupos, e nenhum animal
sucumbiu à infecção. Em contraste, camundongos vacinados com NcESA+CpG ou
NcESA exibiram os mais altos escores de morbidade, alterações de peso corporal e
taxas de mortalidade após desafio, associado com a maior carga parasitária cerebral
determinada por PCR e imunohistoquímica. Pode-se concluir que ODN-CpG foi capaz
de induzir elevada resposta imune humoral e celular do tipo Th1 pela produção de
maiores níveis de IgG2a que IgG1 para qualquer antígeno, NLA ou NcESA, e uma forte
resposta imune celular associada com altos níveis de IFN-g foi relacionada mais ao
antígeno NcESA do que ao adjuvante utilizado. Vacinação com NLA+CpG ou NLA
resultou em total proteção dos camundongos enquanto NcESA+CpG ou NcESA
induziram maior susceptibilidade dos animais após desafio com N. caninum.
Abstract
Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes neuromuscular diseases in
dogs and abortion in cattle worldwide, leading to significant economic losses. Studies
using murine models have contributed to characterize novel antigens and strategies for
successful protocols of vaccination. CpG oligodeoxynucleotides (ODN) have shown to
be potent immunoadjuvants for several pathogens, but there is limited information
concerning its utilization in vaccination for neosporosis. This study aimed to evaluate
the potential of Neospora lysate antigen (NLA) or excreted-secreted antigen (NcESA)
combined with CpG-ODN in inducing enhanced immune response and protection
against N. caninum infection in mice. Six groups of C57BL6 mice were vaccinated
subcutaneously three times at 2-week intervals with NLA, NLA+CpG, NcESA,
NcESA+CpG, CpG (adjuvant control) or PBS (infection control). Serological assays
showed an increased IgG2a response in groups of animals immunized with either
antigen plus adjuvant and elevated levels of the IgG1 isotype in those presenting antigen
preparations alone. Splenocyte proliferative responses upon antigen stimulation in vitro
were higher in groups immunized with either antigen plus CpG, with increased IL-12
production, but mice immunized with NcESA or NcESA+CpG exhibited higher IFN-g
levels and IFN-g/IL-10 ratio. After a month of the 3rd booster and challenge with 2 x 107
N. caninum tachyzoites, mice vaccinated with NLA+CpG or NLA alone had lower
morbidity score and body weight changes in comparison to other groups, and no animal
succumbed to infection. In contrast, mice vaccinated with NcESA+CpG or NcESA
exhibited the highest morbidity scores, body weight changes and mortality rates after
challenge, associated with a greater brain parasite burden determined by PCR and
immunohistochemistry. In conclusion, CpG-ODN was able to induce an increased Th1-
type immune response as determined by higher levels of IgG2a than IgG1 for either
antigen, NLA or NcESA, and a strong cellular immune response associated with high
levels of IFN-g was related to the NcESA antigen rather than the adjuvant used. Also,
vaccination with NLA+CpG or NLA alone resulted in total protection of mice, while
NcESA alone or combined with CpG became mice more susceptible to parasite
challenge.
Palavras-chave
Neospora caninum, ODN-CpG, Adjuvante, Vacinação, CpG-ODN, Adjuvant, Vaccination, Doenças parasitárias
Citação
RIBEIRO, Dâmaso Pacheco. Imunização de camundongos com antígenos de lisado total (NLA) e
de excreção-secreção (NcESA) de Neospora caninum associados com
oligodeoxinucleotídeo CpG como adjuvante. 2008. 75 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.