Publicação: Desenvolvimento de bibliotecas subtrativas de cDNA para análise de sequências diferencialmente expressas no sangue periférico de pacientes com câncer de próstata e de indivíduos saudáveis
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
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Resumo
O câncer de próstata (CaP) tem se manifestado como uma das causas mais comuns de doenças entre homens mais velhos. É o segundo tipo de câncer mais diagnosticado nos Estados Unidos e no Brasil após o câncer de pele, não melanoma. Para auxiliar a compreensão de diversas doenças têm surgido novas técnicas para o estudo da expressão gênica diferencial, que possibilita a identificação de genes relacionados com diversas patologias, inclusive o câncer. Este trabalho teve como objetivo analisar os genes diferencialmente expressos em sangue periférico, por RaSH (Rapid Subtraction Hybridization), entre os grupos câncer de próstata e controle saudável, sendo que foi um "pool" de cada grupo formado por 10 pacientes. O novo procedimento do RaSH pode ser dividido em três principais fases: produção por PCR de fragmentos representativos chamados Tester e Driver, partindo do RNA de cada população; hibridização subtrativa desses fragmentos e por fim a clonagem e sequenciamento dos diferentes produtos obtidos. Nas análises por bioinformática utilizou-se o programa Analisa, via Phred, resultados do Megabace. Posteriormente, as sequências adquiridas foram analisadas em BlastN (nucleotídeos) e no PTC (Protein Classification Tool) para a tradução do cDNA. Foram encontradas 63 sequências de alta qualidade, entre elas 25 corresponderam ao grupo câncer de próstata e 38 ao grupo controle saudável. No programa PTC foram obtidos as seguintes proteínas: catalase, beta hemoglobina e citocromo c. Na análise do BlastN foram encontradas ESTs (expressed Sequence Tags) expressa em estômago e em biblioteca de câncer de próstata. O novo procedimento do RaSH foi eficaz para isolar clones diferencialmente expressos, mas é necessário obter um número maior de clones e também para confirmar a expressão diferencial dos cDNAs com Northern blot.
Abstract
Palavras-chave
Câncer de próstata, RaSH (Rapid Subtraction Hybridization), Genes diferencialmente expressos
Citação
SANTOS, Ana Paula Carneiro dos. Desenvolvimento de bibliotecas subtrativas de cDNA para análise de sequências diferencialmente expressas no sangue periférico de pacientes com câncer de próstata e de indivíduos saudáveis. 2007. 34 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2007.