Publicação: Purificação e caracterização de uma nova fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothrops pauloensis
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Resumo
As fosfolipases A2 (PLA2) são pequenas enzimas que apresentam massa molecular em
torno de 15kDa e são encontradas em uma variedade de fluídos biológicos e celulares,
como fluido sinovial, macrófagos, plaquetas, secreção pancreática, dentre outros. O
presente trabalho descreve a purificação e caracterizações químicas, biológicas e
enzimáticas de uma fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothrops pauloensis. A nova
fosfolipase A2 foi denominada BP-PLA2, esta enzima foi purificada por cromatografia de
troca iônica em CM-Sepharose Fast Flow seguido por cromatografia hidrofóbica em Phenyl
Sepharose CL-4B e finalizando em cromatografia de fase reversa RP-HPLC em coluna C8.
BP-PLA2 consiste em uma proteína de 15.8kDa e ponto isoelétrico de 4.34. A sequência Nterminal
da enzima revelou uma significante homologia com as Asp-49 ácidas de outras
peçonhas de serpentes nos primeiros quinze aminoácidos. A atividade catalítica da BPPLA2
foi de 315 U/mg, mostrando um aumento considerável da atividade PLA2 e foi capaz
de induzir alta atividade hemolítica indireta nos diferentes intervalos de tempo. A
fosfolipase A2 ácida foi capaz de inibir a agregação plaquetária na presença de colágeno,
fato não ocorrido quando esta foi incubada com ADP. Apresentou uma atividade
edematogênica bastante pronunciada em pata de camundongos. BP-PLA2 induziu efeitos
miotóxicos, sendo a caracterização realizada por dosagem de creatina cinase (CK) e
análises morfológicas. Estes estudos indicaram um aumento dos níveis de creatina quinase
plasmáticos no tempo de 1 hora e as análises histológicas indicaram que a PLA2 induziu um
intenso edema, com evidente infiltrado leucocitário e dano nas células musculares após 24
horas de injeção da toxina.
Abstract
Phospholipases A2 (PLA2) is small enzymes that present molecular mass around 15kDa and
are found in a variety of biological and cellular fluids as fluid sinovial, macrophages,
platelet, pancreatic tissue, among others. The present work describes the purification and
chemical, biological and enzymatic characterization of an acidic phospholipase A2 of
Bothrops pauloensis snake venom. New fosfolipase A2 was called BP-PLA2, this enzyme
was purified by ionic exchange in CM-Sepharose Fast Flow followed for hidrophobic
chromatography in Phenyl Sepharose CL-4B and finishing in C8 reverse-phase column.
BP-PLA2 consists of a protein of 15.8kDa and isoelectric point of 4.34. The N-terminal
sequences of the enzyme displayed a significant homology with the Asp-49 acid of other
snake venoms in first fifteen amino acids. The catalytic activity of the BP-PLA2 was 315
U/mg, showing a considerable increase of activity PLA2 and was capable to induce high
indirect hemolytic activity in the different intervals of time. Acidic phospholipase A2 was
capable to inhibit platelet aggregation at the presence of collagen, fact not occurred when
this enzyme was incubated with ADP, showed a sufficiently sharp edematogenic activity in
paw mice. BP-PLA2 induced miotoxic effect, being the characterization carried through for
creatine kinase (CK) levels and morphological analyses. These studies had indicated an
increase of the creatine kinase levels in 1 hour and the histological analyses had indicated
that the PLA2 induced an intense edema with evident leucocitary infiltration and damage in
the muscular cells after 24 hours of injection of the toxin.
Palavras-chave
Bothrops pauloensis, Peçonha, Fosfolipase A2 ácida, Miotoxicidade, Snake venom, Acidic phospholipase A2, Miotoxicity, Proteínas
Citação
RODRIGUES, Renata Santos. Purificação e caracterização de uma nova fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothrops pauloensis. 2006. 103 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006.