Publicação: Azitromicina inibe a infecção por Toxoplasma gondii em oculares de fetos e reduz o parasitismo na infecção congênita e adquirida em modelo experimental de Calomys callosus
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório, amplamente distribuído e que
causa danos graves aos fetos quando são transmitidos durante a gestação e em adultos
imunossuprimidos. As drogas mais utilizadas para o tratamento da toxoplasmose são a
combinação de medicamentos: sulfadiazina, pirimetamina e ácido folínico. Entretanto,
essas drogas demonstram graves efeitos colaterais e, atualmente, a sua eficácia é bastante
discutida na literatura. Outros medicamentos são tidos como alternativos ao tratamento da
toxoplasmose adquirida, dentre eles a clindamicina, a atovaquona e a azitromicina. Essa
última demonstra-se eficaz no combate as formas taquizoítas e bradizoítas, in vitro , do
parasita e apresenta-se com poucos efeitos colaterais na prática clínica. Neste estudo
testamos a eficácia da azitromicina na redução da transmissão congênita de Toxoplasma
analisando olhos de fetos de Calomys callosus, bem como da infecção adquirida em
adultos através da análise do tecido cerebral de fêmeas prenhes e de machos
imunocompetentes. Para a avaliação da infecção vertical, fêmeas de C. callosus foram
inoculadas, oralmente, com 20 cistos da cepa ME49 de T. gondii no 1º dia de gestação e
tratadas com os differentes protocolos. Os fetos foram coletados nos dias 15, 17 e 19 de
gestação-infecção materna. As fêmeas foram divididas em três grupos de tratamento: PBS,
azitromicina (300mg/Kg/dia) e a combinação (SPAf) de sulfadiazina (100 ou 75
mg/Kg/dia), pirimetamina (100 ou 50mg/Kg/dia) e ácido folínico (15mg/Kg/dia). Os
medicamentos foram administrados oralmente em diferentes dias após a infecção. As
fêmeas foram sangradas no primeiro dia de gestação e no dia do sacrifício para a realização
de teste ELISA para confirmar soroconversão. Para análise da infecção adquirida, machos
de C. callosus seguiram o mesmo protocolo de infecção e tratamento das fêmeas grávidas,
mas por tempos diferentes. Os cérebros maternos e de machos adultos, bem como os olhos
dos fetos foram dissecados e embebidos em parafina para análise por imunohistoquímica
usando anticorpo policlonal anti-T. gondii. Um dos olhos de fetos sacrificados no 19º dia
foi utilizado para a detecção de DNA do parasita pela técnica de PCR em tempo real. A
quantidade de parasitas estava significantemente reduzida em tecido cerebral das fêmeas
tratadas com azitromicina quando comparados a SPAf ou com veículo. Nas regiões
oculares fetais, não foram detectados parasitas nos animais tratados com azitromicina. Não
houve diferença na infecção ocular fetal entre os animais tratados com a SPAf ou PBS. Na
infecção adquirida, a azitromicina reduziu a quantidade de parasitas em vacúolos
parasitóforos e estruturas como cistos. Nosso trabalho demonstrou a eficácia da
azitromicina no combate à infecção ocular congênita, na redução da carga parasitária nos
cérebros maternos e de machos adultos imunocompetentes mostrando ser uma possível
alternativa no tratamento da toxoplasmose.
Abstract
Toxoplasma gondii is an obligatory intracelullar parasite of large geographical distribution
that causes severe sequelae to fetuses of mothers infected for the first time during
pregnancy and in immunossuppressed adults. The drugs most frequently used for the
treatment of toxoplasmosis are a combination of sulfadiazine and pirimethamine plus
folinic acid. However, these drugs present severe side effects and currently their efficacy is
under study. Other medicines that are considered as alternatives for the treatment are
clindamycin, atovaquone and azithromycin. The latter has demonstrated to be effective
againts both tachyzoites and bradyzoites in vitro with lesser side effects in clinical practice.
In this study we tested the efficacy of azithromycin on the reduction of vertical
transmission of Toxoplasma, by the analyses of fetal eyes of Calomys callosus, as well as
the acquired adult infection analyzing brains of the mothers and adult males. For the
analysis of the treatment on the vertical transmission, females of C. callosus were
inoculated perorally with 20 cysts of the ME49 strain of T. gondii on the first day of
pregnancy and then received the different treatments. Fetuses and mothers brains were
collected on days 15, 17 e 19 of gestation/infection. Females were sorted into three
treatment groups: control (vehicle), azithromycin (300mg/kg/dia) and the association of the
drugs sulfadiazine (100 or 75 mg/Kg/day), pyrimethamine (100 or 50mg/Kg/day) and
folinic acid (15mg/Kg/day). The drugs were administered orally starting at different days
post-infection and animals were bled on the first day of pregnancy and on the day of
sacrifice to perform ELISA tests for the detection of anti-T. gondii antibodies. For the
analyses of acquired infection, adult males were infected and treated using the same drugs
as the females, for either the same or longer periods. After treatment, animals were
sacrificed and the brains were collected from the adults and eyes from the fetuses. All
samples were processed for immunohistochemistry, using a policlonal antibody against
T.gondii , while one of the eyes of fetuses from day 19 were also processed for real time
PCR detection of parasite DNA. Parasite load was significantly reduced in brain tissues of
females treated with azithromycin when compared to SPAf treatment. In fetuses of
azithromycin-treated mothers no parasites were detected in the eyes analyzed. No
difference was seen in parasite load when the SPAf-treated group was compared to the
control group. In brain tissues of adult males, there was significant reduction in parasite
numbers in the azithromycin-treated animals. Our study demonstrated a good efficacy of
azithromycin for the treatment of pregnant females, diminishing fetal ocular infection, as
well as for the treatment of adult animals, representing an alternative choice for the
treatment of toxoplasmosis.
Palavras-chave
Toxoplasma gondii, Infecção congênita, Infecção adquirida, Azitromicina, Calomys callosus, Congenital infection, Acquired infection, azithromycin, Toxoplasmose
Citação
LOPES, Carla Duque. Azitromicina inibe a infecção por Toxoplasma gondii em oculares de fetos e reduz o parasitismo na infecção congênita e adquirida em modelo experimental de Calomys callosus. 2008. 79 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.