Publicação: Infecção por Toxoplasma gondii e Neospora caninum em
cães e lobos-guará: soroepidemiologia e imunodiagnóstico
Carregando...
Tipo do documento
Data
Direito de acesso
Área do conhecimento
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Orientador
Coorientador
Resumo
Toxoplasma gondii e Neospora caninum são parasitos protozoários do filo Apicomplexa
estreitamente relacionados, embora apresentem diferenças filogenéticas, ultraestruturais,
antigênicas e biológicas. Estudos soroepidemiológicos têm demonstrado que a infecção por T.
gondii é relativamente freqüente em canídeos domésticos e silvestres, enquanto a infecção por
N. caninum é menos comum, mas tem grande importância epidemiológica porque cães e
coiotes são seus hospedeiros definitivos. A presente tese é composta por cinco estudos
referentes à infecção por T. gondii e N. caninum em cães (Canis familiaris) e lobos-guará
(Chrysocyon brachyurus), desenvolvidos no Laboratório de Imunoparasitologia da
Universidade Federal de Uberlândia, com enfoque em soroepidemiologia e imunodiagnóstico.
Diferentes preparações de antígenos destes parasitos, bem como várias modalidades de testes
sorológicos, tais como hemaglutinação indireta (IHAT), imunofluorescência indireta (IFAT),
imunoenzimáticos (ELISA), immunoblotting e imunoprecipitação foram desenvolvidos e
aplicados em diversas populações de cães e lobos-guará. O primeiro estudo determinou os
títulos ótimos de cut off em IFAT (1:16) e ELISA (1:64) para detecção de anticorpos IgG anti-
T. gondii em cães usando a curva TG-ROC (two-graph receiver-operating characteristic) e
considerando a reatividade ao antígeno de superfície SAG1 como marcador de infecção. O
segundo estudo desenvolvou um ELISA de captura IgM utilizando anticorpos heterólogos
(anti-IgM humana) e revelou um perfil transitório de IgM na toxoplasmose aguda canina,
enquanto a cinética de IgG anti-T. gondii em cães demonstrou uma resposta imune precoce e
duradoura. T. gondii foi isolado por bioensaio e detectado por imunohistoquímica somente de
cães com toxoplasmose fatal. O terceiro estudo demonstrou que a soropositividade a N.
caninum (6,7%) foi menor que para T. gondii (36%) em cães com sintomas clínicos, incluindo
casos de co-infecção (3,1%). O quarto estudo determinou os títulos ótimos de cut off em IFAT
(1:50) e ELISA (1:200) para detecção de IgG anti-N. caninum em cães, usando a curva TGROC,
mas ELISA mostrou baixa especificidade. Os antígenos imunodominantes de N.
caninum, especialmente aqueles abaixo de 35 kDa, foram fracamente inibidos por antígenos
de T. gondii em immunoblotting de inibição, indicando ser mais espécie-específicos. O quinto
estudo demonstrou a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum no lobo-guará (8,5%), embora
em menor proporção quando comparado a T. gondii (74,6%), utilizando conjugados
homólogos (anti-IgG lobo), heterólogos (anti-IgG de cão) ou de afinidade (Proteína A), em
ELISA ou IFAT. Os resultados destes estudos permitiram concluir que o diagnóstico da
infecção por T. gondii em cães deve ser baseado na combinação de testes sorológicos,
particularmente IFAT e ELISA, com ênfase na determinação dos títulos e classes de
anticorpos, como IgM específica, que foi detectada pelo ELISA de captura IgM, utilizando
anticorpos heterólogos. A infecção por N. caninum parece estar presente em cães de
Uberlândia, MG e deve ser considerada no diagnóstico clínico diferencial com T. gondii em
animais com sinais clínicos, empregando preferencialmente IFAT e immunoblotting para
detectar antígenos imunodominantes. A ocorrência de anticorpos anti-T. gondii e anti-N.
caninum em lobos-guará pôde ser avaliada por conjugados homólogos, heterólogos e de
afinidade, indicando a relevante exposição desta espécie de canídeo silvestre a T. gondii e, em
menor extensão, a N. caninum.
Abstract
Toxoplasma gondii and Neospora caninum are two closely related apicomplexan parasites,
even though phylogenetic, ultrastructural, antigenic and biological differences have been
already described. Seroepidemiological studies have demonstrated that T. gondii infection is
often in domestic and sylvatic canids, whereas N. caninum infection is less common, but it is
epidemiologically relevant because dogs and coyotes are their definitive hosts. This thesis is
consisted of five studies on T. gondii and N. caninum infection in dogs (Canis familiaris) and
maned wolves (Chrysocyon brachyurus) conducted in the Immunoparasitology Laboratory,
Federal University of Uberlândia, with emphasis on seroepidemiology and immunodiagnosis.
Different antigen preparations and various serological tests, such as indirect hemagglutination
test (IHAT), indirect fluorescence antibody test (IFAT), immunoenzymatic test (ELISA),
immunoblotting and immunoprecipitation were developed and employed in different dog and
maned wolf populations. The first study established the optimal cut off titers in IFAT (1:16)
and ELISA (1:64) for the detection of IgG antibodies to T. gondii in dogs by using the twograph
receiver-operating characteristic (TG-ROC) curve and considering the reactivity to the
major surface antigen SAG1 as infection marker. The second study developed a capture IgMELISA
using heterologous antibodies (anti-human IgM) and showed a transient IgM profile in
canine acute toxoplasmosis, whereas the kinetics of IgG antibodies to T. gondii in dogs
revealed an early and long-time immune response. T. gondii was demonstrated by mouse
bioassay and immunohistochemical assay only from dogs with fatal toxoplasmosis. The third
study showed that seropositivity to N. caninum (6.7%) was lower than to T. gondii (36%) in
dogs with clinical symptoms, including animals with co-infection (3.1%). The fourth study
established the optimal cut off titers in IFAT (1:50) and ELISA (1:200) for the detection of
IgG antibodies to N. caninum in dogs by using TG-ROC curve, but ELISA showed low
specificity. Immunodominant antigens of N. caninum, especially those below 35 kDa, were
weakly inhibited by T. gondii antigens in inhibition immunoblotting, indicating that they are
more species-specific antigens. The fifth study showed the occurrence of antibodies to N.
caninum in maned wolves (8,5%), even though in lower proportion as compared to T. gondii
(74.6%), by using homologous (anti-wolf IgG), heterologous (anti-dog IgG) or affinity
(Protein A) conjugates in ELISA or IFAT. Altogether, it can be concluded that the diagnosis
of T. gondii infection in dogs should be based on the combination of serological tests,
particularly IFAT and ELISA, with emphasis in the determination of antibody titers and
classes, such as specific IgM, which was efficiently detected by capture IgM-ELISA using
heterologous antibodies. N. caninum infection can be present in dogs from Uberlândia city
and should be considered in the differential clinical diagnosis with T. gondii in dogs
presenting clinical signs, by using preferentially IFAT and immunoblotting to detect
immunodominant antigens. The occurrence of antibodies to T. gondii and N. caninum in
maned wolves could be evaluated by homologous, heterologous and affinity conjugates,
indicating a relevant exposure of this species to T. gondii and, in lower extension, to N.
caninum.
Palavras-chave
Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Cães, Lobos-guará, Sorodiagnóstico, Dogs, Maned wolves, Serodiagnosis, Doenças parasitárias
Citação
SILVA, Deise Aparecida de Oliveira. Infecção por Toxoplasma gondii e Neospora caninum em
cães e lobos-guará: soroepidemiologia e imunodiagnóstico. 2006. 143 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006.