Publicação: Identificação de isoformas de Blomia tropicalis (Acari: Echimyopodidae) ligantes de anticorpos IgE de pacientes sensibilizados a ácaros da poeira domiciliar
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Orientador
Coorientador
Silva, Deise Aparecida de Oliveira
Resumo
Blomia tropicalis (Bt) é um ácaro da poeira domiciliar comum em regiões tropicais e
importante fonte de alérgenos para a indução de doenças alérgicas respiratórias. Até
o momento, a maioria dos alérgenos de Bt identificados mostrou homologia de
seqüência com outros alérgenos de ácaros da poeira, como Dermatophagoides spp. O
objetivo deste estudo foi investigar os principais alérgenos com reatividade a
anticorpos IgE no soro de pacientes alérgicos.
Métodos: O extrato Bt foi submetido à eletroforese bidimensional (2D) e soros de
pacientes sensibilizados a ácaros com teste cutâneo positivo a Bt, foram selecionados
por ELISA para a presença de anticorpos IgE específicos e utilizados em ensaios de
immunoblot uni- e bidimensional. Immunoblot de inibição 1D foi realizado para avaliar
a reatividade cruzada com Dermatophagoides spp. Spots visualizados no gel 2D que
apresentaram reatividade a IgE do soro de pacientes alérgicos foram excisados e
identificados por espectrometria de massa.
Resultados: Alérgenos de Bt com baixo (14-16 e 25 kDa) e alto peso molecular (54-134
kDa) apresentaram mais de 50% de reatividade a anticorpos IgE no soro de pacientes
alérgicos e foram considerados imunodominantes. Uma alta taxa de inibição
homóloga (> 80%) foi observada para todas as bandas imunodominantes. Quase
todos os componentes imunodominantes de alto peso molecular mostraram uma
taxa expressiva de inibição heteróloga. No entanto, a menor inibição heteróloga foi
encontrada para os compostos imunodominantes de baixo peso molecular (25 e 14
kDa). Mais de 50 spots foram identificados pelo gel 2D, dos quais 15 alérgenos
apresentaram reatividade IgE no immunoblot 2D. Isoformas do alérgeno Blo t 3, já
conhecido com a função molecular enzimática da tripsina, foram identificadas por
espectrometria de massa. Blo t 11 foi considerado um alérgeno hipotético. Outras
isoformas ligantes de IgE, tais como as enzimas aldeído desidrogenase (Blo t ALDH)
e hexosaminidase (Blot HEXM), e uma isoforma com função desconhecida (Blo t 2),
também foram identificadas.
Conclusões: Os alérgenos Blo t 11, Blo t 3, Blo t 2 e possivelmente Blo t ALDH e Blo t
HEXM demonstraram ser alérgenos imunodominantes em pacientes sensibilizados a
ácaros da poeira domiciliar de nossa região.
Abstract
Background: Blomia tropicalis (Bt) is a common house dust mite in tropical regions
and important source of allergens for the induction of respiratory allergic diseases.
Most Bt allergens identified so far, however, have shown sequence homology to
other dust mite allergens, such as Dermatophagoides spp. The aim of this study was to
investigate major IgE-binding isoforms for screening Bt allergens.
Methods: We used two-dimensional (2D)-gel electrophoresis of crude Bt extract and
sera from mite-sensitized patients with positive skin prick test to Bt that were
screened for specific IgE antibodies in ELISA, followed by one-dimensional (1D-) and
2D-immunoblots. Inhibition 1D-immunoblot was performed to visualize the
crossreactivity with Dermatophagoides spp. From 2D gels, corresponding IgE-binding
spots were excised and identified by mass spectrometry.
Results: IgE-binding Bt allergens with low molecular weight (LMW, 14-16 and 25
kDa) and high molecular weight (HMW, 54-134 kDa) showed >50% recognition and
were considered immunodominant bands. A high homologous inhibition rate (>80%)
was demonstrated with all immunodominant bands. Nearly all HMW
immunodominant components showed an expressive rate of heterologous inhibition.
However, the low heterologous inhibition was found to LMW immunodominant
compounds (25 and 14 kDa). More than 50 spots were identified by stained 2D gel of
Bt extract, from which 15 allergens showed IgE reactivity in 2D-immunoblot. Blo t 3
isoforms with enzymatic molecular function of trypsin were identified by mass
spectrometry. Blo t 11 was considered as a hypothetical allergen. Other IgE-binding
isoforms, such as the enzymes aldehyde dehydrogenase (Blo t ALDH),
hexosaminidase (Blo t HEXM), and unknown function (Blo t 2) were also identified.
Conclusions: The results indicate several isoforms (Blo t 11, Blo t 3, Blo t 2 and
probably Blo t ALDH and Blo t HEXM ) from B. tropicalis recognized by IgE
antibodies in Brazilian mite-allergic patients as potential candidates for diagnosis
and allergen-specific immunotherapy of allergic diseases.
Palavras-chave
Rinite alérgica, Blomia tropicalis, Reactividade cruzada, Ácaros da
poeira domiciliar, IgE, Allergic rhinitis, Cross-reactivity, House dust mite allergens, Febre do feno, Alergia
Citação
ALMEIDA, Karine Cristine de. Identificação de isoformas de Blomia tropicalis (Acari: Echimyopodidae) ligantes de anticorpos IgE de pacientes sensibilizados a ácaros da poeira domiciliar. 2010. 109 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010. DOI https://doi.org/10.14393/ufu.te.2011.3