Publicação: Análise computacional da cromatina de espermatozóides de galo (Gallus gallus) e determinação do período de armazenamento dos espermatozóides nas espermatecas de galinhas
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CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::CLINICA E CIRURGIA ANIMAL::CLINICA VETERINARIA
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Resumo
Os objetivos desse trabalho foram testar novas variantes
metodológicas utilizando coloração com azul de toluidina, até se estabelecer
um protocolo confiável para a avaliação computacional da compactação da
cromatina em espermatozóides de galo, buscar alterações na compactação da
cromatina durante o armazenamento dos mesmos na espermateca de
galinhas, observar a duração do período de armazenamento e estimar a
variação na quantidade de espermatozóides armazenados nos segmentos
cranial, médio e caudal da região da espermateca durante 23 dias. Para
avaliação computacional da compactação da cromatina, foram utilizadas 20
amostras de sêmen de galo, sendo 10 amostras de galos com 35 semanas de
idade (Galos Novos) e 10 amostras de galos com 60 semanas de idade (Galos
Velhos). Para a análise dos espermatozóides durante o armazenamento nas
espermatecas das galinhas, foram utilizadas 48 matrizes pesadas (44 fêmeas e
4 machos) da linhagem Cobb avian 48 com 36 semanas de idade. Foi coletado
material da junção utero-vaginal das fêmeas por 23 dias após a cópula com os
machos, sendo que a cada 4 dias, 6 fêmeas foram sacrificadas para confecção
de lâminas histológicas da região da espermateca. Foram testados diferentes
métodos de desnaturação e coloração com AT, sendo que o melhor foi a
hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com
azul de toluidina 0,025%, pH 4,0, por 20 minutos, desidratação em álcool,
diafanização em xilol e montagem com bálsamo do Canadá. Todas as
amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e posteriormente
avaliadas por análise de imagem computacional, onde foram mensuradas as
cabeças dos espermatozóides quanto a área, comprimento, largura, perímetro,
homogeneidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça e
intensidade de compactação da cromatina. Os espermatozóides de galos
velhos apresentaram mais alterações na cromatina do que os de galos jovens.
Os galos jovens apresentaram cabeças de espermatozóides maiores do que galos velhos. Não foi possível determinar as alterações na compactação da
cromatina dos espermatozóides dos galos após o armazenamento na
espermateca pelo método utilizado. Foram encontrados espermatozóides por
toda a extensão das espermatecas, sendo que esses se concentravam no
segmento médio da junção utero-vaginal. Não houve diferença estatística
significativa na quantidade de espermatozóides presentes na espermateca no
decorrer dos dias de experimento. Foram observadas grandes quantidades de
células espermáticas até o 23º dia de coleta. Portanto, o período de
armazenamento de espermatozóides em galinhas é de, no mínimo 23 dias.
Abstract
The objectives of this work were to evaluate new
methodological variants using toluidina blue (AT), to establish a trustworthy
protocol for the computational evaluation of the chromatin compaction of the
fowl s spermatozoa, to find out alterations in the chromatin compactation during
the storage in the sperm storage tubules of fowl hens, to observe the storage
time and to estimate the variation in the amount of stored spermatozoa in the
cranial, medium and caudal sections of the uterovaginal junction during 23
days. Twenty semen samples were used: 10 from fowls that were 35 weeks old
and had high fertility (young fowls) and 10 from fowls that were 60 weeks and
had low fertility (Old fowls). To the analysis of the spermatozoa during the
storage in the sperm storage tubules of hens, 48 thirty-six- week-old meat
chickens (44 hens and 4 fowls) of the Cobb Avian 48 strain were also used. A
sample from the uterovaginal junction of the hens was collected for 23 days
after the match with the fowls, 6 hens being sacrificed every four days to make
histological microscope slides. Different methods of denaturation and staining
were tested. The best method with AT was the hydrolysis with 1N HCl for 10
minutes, staining in bucket with 0.025% AT, pH 4,0, for 20 minutes, dehydration
in alcohol, clearing in xylol and mounted with Canada balsam. All the semen
samples were submitted to this protocol and later evaluated through
computational image analysis. Area, length, width, perimeter and the chromatin
compaction homogeneity of head spermatozoa were measured. The sperm of
old fowls presented more chromatin changes than the ones of young fowls. The
spermatozoa of the young fowls presented bigger heads than the ones of old
fowls. It was not possible to determine the chromatin compaction alterations of
the fowl sperm after their storage in the sperm storage tubules through the used
method. Spermatozoa were found through out the area of the sperm storage
tubules. Most of then gathered in the medium section of the uterovaginal
junction. There was not meaningful statistical difference in the amount of sperm in the sperm storage tubules over the days of the experiment. A greater amount
of sperm cells were observed until the 23rd day of assessment. Therefore, the
storage time of the spermatozoa in hens lasts at least 23 days.
Palavras-chave
Azul de toluidina, Cromatina, Espermateca, Galo, Túbulos de
armazenamento de espermatozóides, Chromatin condensation, Fowl sperm, Sperm storage tubules, Toluidine blue, Utero-vagina junction, Ave doméstica - Reprodução
Citação
RODRIGUES, Ana Carolina Nunes. Computacional analysis of the chromatin of fowl s
spermatozoa (Gallus gallus) and determination of the storage
time of spermatozoa in the sperm storage tubules in fowl
hens. 2007. 54 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Agrárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2007.