Publicação: Utilização do “Phage Display” para a identificação de peptídeos reconhecidos por Imunoglobulinas Y Policlonais anti-proteínas totais de larvas do Boophilus microplus
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Peptídeos foram selecionados por IgY policlonais específicas para proteínas totais do estádio larval do Boophilus microplus através da utilização de uma biblioteca de peptídeos sintéticas apresentada em fagos. Inicialmente, para a produção de soro policlonal, galinhas foram imunizadas com proteínas totais do estádio larval do parasita. A triagem foi monitorada por ELISA durante o período das injeções, para confirmação do desenvolvimento de resposta imune. Após obtenção de título satisfatório, as imunoglobulinas foram precipitadas e caracterizadas parcialmente. O processo de obtenção de imunoglobulinas a partir do soro de galinhas foi satisfatório e os anticorpos policlonais foram funcionalmente ativos quanto ao reconhecimento dos antígenos totais. Posteriormente, uma biblioteca de peptídeos fusionada na Proteína III capsídica de fagos foi submetida à seleção contra imunoglobulinas Y policlonais purificadas por afinidade ao imunógeno. O conjunto dos peptídeos foi reconhecido pelos anticorpos anti-proteínas de carrapato e a antigenicidade de cada peptídeo foi deduzida por bioinformática. As seqüências consenso NxxxKxxL e TPDKS foram identificadas em 65% e 12% dos fagos seqüenciados, respectivamente. Seqüências similares foram identificadas entre os peptídeos e as proteínas do B. microplus depositadas no “GENEBANK”.
Pelo processo de seleção foi possível a identificação de prováveis alvos protéicos. Em vista disso, testes de imunizações em animais estão sendo desenvolvidos para determinação da resposta imune geradas pelos peptídeos obtidos neste trabalho.
Abstract
Peptides were selected by polyclonal IgY specific for Boophilus microplus larval stage total proteins using a library of synthetic peptides presented in phages. Initially, for the production of polyclonal serum, chickens were immunized with total parasite larval stage proteins. Screening was monitored by ELISA during the injection period to confirm the development of immune response. After obtaining a satisfactory titer, the immunoglobulins were precipitated and partially characterized. The process of obtaining immunoglobulins from chicken serum was satisfactory and polyclonal antibodies were functionally active for recognition of total antigens. Subsequently, a peptide library fused to phage capsid Protein III was screened against polyclonal Y immunoglobulin purified by immunogen affinity. All peptides were recognized by tick anti-protein antibodies and the antigenicity of each peptide was deduced by bioinformatics. The consensus sequences NxxxKxxL and TPDKS were identified in 65% and 12% of sequenced phages, respectively. Similar sequences have been identified between peptides and B. microplus proteins deposited in the GENEBANK.
Through the selection process it was possible to identify probable protein targets. Therefore, animal immunization tests are being developed to determine the immune response generated by the peptides obtained in this work.
Palavras-chave
Phage Display, Anticorpos policlonais, Peptídeos, Peptides, Polyclonal Antibodies
Citação
PRUDENCIO, Carlos Roberto. Utilização do “Phage Display” para a identificação de peptídeos reconhecidos por Imunoglobulinas Y Policlonais anti-proteínas totais de larvas do Boophilus microplus. 2004. 77 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Bioquímica) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2019. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2004.14
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