Publicação: Desenvolvimento de estratégias antivirais frente a vírus emergentes
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::MICROBIOLOGIA APLICADA
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Vírus emergentes representam ameaças crescentes à saúde pública, especialmente no Brasil, onde
fatores ambientais e sociodemográficos favorecem surtos epidêmicos. Este trabalho teve como
objetivo identificar e caracterizar compostos antivirais contra os vírus emergentes Orthobunyavirus
oropoucheense (OROV) e o Betacoronavirus pandemicum (SARS-CoV-2), por meio da triagem de
médio rendimento das bibliotecas Pandemic Response Box (PRB) e Global Health Priority Box
(GHPB) da Medicines for Malaria Venture (MMV). O OROV é o agente da febre Oropouche, que
causou mais de 13.000 casos no Brasil em 2024, com expansão geográfica inédita, transmissão
vertical, complicações neurológicas e óbitos confirmados, sem nenhum antiviral aprovado
disponível. O SARS-CoV-2, responsável pela pandemia de COVID-19 com mais de 779 milhões
de casos até 2026, permanece um desafio terapêutico, especialmente frente às variantes de
preocupação Delta e Omicron. A abordagem experimental empregou vírus repórteres fluorescentes,
BUNV-eGFP (Bunyamwera vírus com repórter da proteína verde fluorescente aprimorada) como
modelo prototípico do OROV, e SARS-CoV-2-mCherry (SARS-CoV-2 com repórter de proteína
monomérica vermelha fluorescente), para triagem direta, em células A549 e A549-AT, com leitura
automatizada no sistema IncuCyte S3. Das 640 moléculas testadas, foram identificados e validados
compostos ativos para ambos os alvos. Para o OROV, nove compostos da PRB inibiram a replicação
do BUNV em mais de 90%. Após validação com o OROV selvagem (cepa epidêmica AM0088),
três hits foram confirmados: Trimetrexate, MMV1634385 e GSK-983, com GSK sendo o composto
com maior inibição (EC50 = 0,5 μM contra OROV; inibidor de DHODH; SI > 20), identificado pela
primeira vez como anti-orthobunyavirus e apontado como o composto mais promissor. Para o
SARS-CoV-2, dois hits foram caracterizados mecanisticamente. Revaprazan (EC50 = 1,3 μM; SI >
7,7), um bloqueador de ácido competitivo com potássio (P-CAB) aprovado clinicamente, inibiu a
entrada viral, mantendo atividade contra Delta e Ômicron BA.2, primeiro relato de atividade
antiviral para um composto da classe P-CAB. Milbemectin (EC50 = 1,6 μM; SI > 6), macrolídeo
antiparasitário relacionado à ivermectina, atuou predominantemente em etapas pós-entrada,
interferindo na montagem e egresso viral. Os resultados estabelecem GSK-983, Revaprazan e
Milbemectin como candidatos prioritários para estudos pré-clínicos, ampliam o espectro antiviral
de moléculas com perfil de segurança conhecido e validam a plataforma de triagem por repórteres
fluorescentes como estratégia robusta para a descoberta de antivirais frente a ameaças virais
emergentes.
Abstract
Emerging viruses pose growing threats to public health, particularly in Brazil, where environmental
and sociodemographic factors favour epidemic outbreaks. This work aimed to identify and
characterise antiviral compounds against the emerging viruses Orthobunyavirus oropoucheense
(OROV) and Betacoronavirus pandemicum (SARS-CoV-2) through medium-throughput screening
of the Pandemic Response Box (PRB) and Global Health Priority Box (GHPB) libraries from the
Medicines for Malaria Venture (MMV). OROV is the causative agent of Oropouche fever, which
caused over 13,000 cases in Brazil in 2024, with unprecedented geographical expansion, vertical
transmission, neurological complications and confirmed fatalities, with no approved antiviral
treatment available. SARS-CoV-2, responsible for the COVID-19 pandemic with over 779 million
cases recorded through 2026, remains a therapeutic challenge, particularly against the Delta and
Omicron variants of concern. The experimental approach employed fluorescent reporter viruses,
BUNV-eGFP (Bunyamwera virus with an enhanced green fluorescent protein reporter) as a
prototypic model for OROV, and SARS-CoV-2-mCherry (SARS-CoV-2 with a monomeric red
fluorescent protein reporter) for direct screening, in A549 and A549-AT cells, with automated
readout using the IncuCyte S3 system. Of the 640 compounds tested, active hits were identified and
validated for both viral targets. Against OROV, nine compounds from the PRB inhibited BUNV
replication by more than 90%. Following validation against wild-type OROV (epidemic strain
AM0088), three hits were confirmed: Trimetrexate, MMV1634385, and GSK-983, being GSK the
compound with greatest inhibition (EC50 = 0.5 μM against OROV; DHODH inhibitor; SI > 20),
reported here for the first time as an anti-orthobunyavirus compound and identified as the most
promising candidate. Against SARS-CoV-2, two hits were mechanistically characterised.
Revaprazan (EC50 = 1.3 μM; SI > 7.7), a clinically approved potassium-competitive acid blocker
(P-CAB), inhibited viral entry while retaining activity against Delta and Omicron BA.2,
representing the first report of antiviral activity for a P-CAB-class compound. Milbemectin (EC50
= 1.6 μM; SI > 6), a milbemycin-class macrolide antiparasitic structurally related to ivermectin,
acted predominantly at post-entry stages, interfering with virion assembly and egress. Together,
these findings establish GSK-983, Revaprazan and Milbemectin as priority candidates for
preclinical investigation, expand the antiviral spectrum of compounds with established safety
profiles, and validate the fluorescent reporter-based screening platform as a robust strategy for
antiviral discovery against emerging viral threats.
Palavras-chave
Vírus Oropouche, SARS-CoV-2, Antivirais, Antivirals, Triagem de compostos, Compound screening, Reposicionamento de fármacos, Drug repurposing, Vírus emergentes, Emerging viruses, Imunologia, Immunology
Citação
CASSANI, Natasha Marques. Desenvolvimento de estratégias antivirais frente a vírus emergentes. 2026. 163 f. Tese (Doutorado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2026. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.te.2026.495.
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