Publicação: Isolamento e purificação de exossomos
de indivíduos não-atópicos e sua influência no
perfil de citocinas secretadas in vitro por
leucócitos de indivíduos atópicos
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Coorientador
Napolitano, Danielle Reis
Resumo
A alergia é um problema de saúde pública que afeta a qualidade de vida de
milhões de crianças e adultos. Sua prevalência tem aumentado drasticamente
em muitos países. Atualmente, muitos estudos têm mostrado que nanovesículas
membranosas, chamadas exossomos são secretadas por um grande número de
células implicadas na alergia, incluindo mastócitos, células dendríticas,
linfócitos T e B. Os exossomos têm origem endossomal, são produzidos em
condições fisiológicas e nas patologias, sua secreção mostra-se aumentada. O
objetivo deste estudo foi isolar exossomos de indivíduos não-atópicos e avaliar
a sua influência no perfil de citocinas produzidas in vitro por leucócitos de
indivíduos atópicos. Os exossomos foram isolados a partir de células
mononucleares do sangue periférico de indivíduos não-atópicos e
caracterizados pelo perfil eletroforético de suas proteínas, pela marcação com
proteínas específicas - Receptor transferrina 2 (TFR2), CD63, CD81 e pela
análise ultraestrutural. Estes exossomos foram então usados para estimular in
vitro as células mononucleares do sangue periférico de indivíduos atópicos. Foi
feita análise quantitativa da produção de citocinas no sobrenadante de cultura
celular por ensaio enzimático.
Os exossomos foram capazes de modular negativamente a produção de
citocinas pró-inflamatórias como IFN-_ e IL-17, porém não foram capazes de
inibir as respostas imunes de perfil Th2. A resposta imune obtida a partir do
estímulo com exossomos mostrou-se imunomoduladora ao invés de
imunossupressora como era esperado.
Abstract
Allergy is a public health problem that affects children and adults. Its
prevalence has increased dramatically in many countries. Nowadays, many
studies have shown that nanovesicles membranous, called exosomes, are
secreted by a large number of cells implicated in allergy, including mast cells,
dendritic cells, T and B lymphocyte. These nanovesicles have endosomal origin,
are produced under physiological and pathological conditions, when the
secretion appears to be increased. The aim of this study was to isolate exosomes
from healthy subjects, non-atopic, and to evaluate their influence in cytokine
profile secreted in vitro by leukocytes of atopic subjects. Exosomes were isolated
from peripheral blood mononuclear cells from healthy subjects and
characterized by protein electrophoretic profile by staining with specific
proteins (transferin receptor 2 - TFR2, CD63 and CD81) and by ultrastructural
analysis. These exosomes were then used to stimulate in vitro peripheral blood
mononuclear cells of atopic subjects. Quantitative analysis was made of the
production of cytokines in culture supernatants. The exosomes were able to
modulate negatively the production of proinflammatory cytokines such as IFN-
_ and IL-17 by peripheral blood mononuclear cells, but were not able to inhibit
Th2 immune responses. The immune response obtained from stimulation with
exosomes was shown immunomodulatory effect rather than
immunosuppressive effect, as expected.
Palavras-chave
Exossomos, Citocinas, Efeito imunomodulador, Exosomes, Allergy, Cytokines, Immunomodulatory effects, Alergia
Citação
ACERBI, Helena Maria Caleiro. Isolamento e purificação de exossomos
de indivíduos não-atópicos e sua influência no
perfil de citocinas secretadas in vitro por
leucócitos de indivíduos atópicos. 2010. 124 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010.