Publicação: Papel de PI3K na invasão celular e maturação de fagolisossomos de L. (L.) amazonensis
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Silva, Cláudio Vieira da
Resumo
A leishmaniose tegumentar, causada por Leishmania (L.) amazonensis, está amplamente
distribuída em todo território nacional, manifestando-se como lesões graves disseminadas no
homem e animais. Durante a invasão de microorganismos, células fagocíticas são ativadas,
sendo que um dos eventos sinalizadores é a fosforilação de substratos pela enzima fosfatidilinositol-
3-quinase (PI3K), que mediante uma ampla variedade de estímulos extracelulares,
gera produtos lipídicos específicos que propagam sinais intracelulares através de proteínas
mediadoras subseqüentes, gerando fluxos secundários de sinalização. No processo de invasão,
ocorre o recrutamento do citoesqueleto e fusão com lisossomos para a formação do
fagolisossomo. A modulação, por patógenos, da sinalização dependente da via PI3K na célula
hospedeira é uma importante estratégia para estabelecimento da infecção e sobrevivência
intracelular destes organismos. Objetivamos estudar a maturação de fagolisossomos de L.(L.)
amazonensis através da marcação de F-Actina e Proteína de Membrana Associada a
Lisossomos (LAMP-1), bem como o papel da PI3K no processo de invasão celular e
maturação dos fagolisossomos de L.(L.) amazonensis. Macrófagos peritoneais murinos,
tratados ou não com wortmanina (um inibidor da via PI3K), foram infectados com
promastigotas de L.(L) amazonensis. Para validar a participação desta via na invasão por esta
espécie de Leishmania, os macrófagos foram transfectados com plasmídeo GFP-PLC-δ-PH,
com homologia com a região de PI(4,5)P2, um componente da via de fosforilação PI3K, após
o qual foram infectados. Nossos resultados demonstraram que durante o processo de
maturação de fagolisossomo de L.(L.) amazonensis, há primeiramente um recrutamento de Factina
para formação do fagossomo/endossomo precoce, sendo que a F-actina despolimeriza
quando há fusão com lisossomos, evidenciado pelo recrutamento de LAMP-1, marcador de
lisossomos. Os processos de invasão e fusão lisossomal de L.(L.) amazonensis demonstraram
clara dependência da atividade de PI3K, evidenciado pela diminuição desses processos pelo
inibidor de PI3K, a wortmanina.
Abstract
Cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (L.) amazonensis is largely distributed
throughout the country and can manifest as severe and disseminated lesions in man and other
animals. During microorganism invasion phagocytes are activated and one of the signs of this
activation is the phosphorylation of specific substrates by the enzyme phosphatidylinositol-3-
kinase (PI3K), which is in its turn activated by a variety of extracellular signals, generating
lipid products that will serve as mediator in signal transduction downstream. During parasite
invasion of the host cells there is recruitment of cytoskeleton proteins to form a phagosome,
followed by fusion with lysosomes to generate the phagolysosome, where the parasites will
thrive. Modulation of PI3K signaling pathways by parasites are important strategies for the
establishment of the infection and intracellular survival of intracellular parasites. In this study
we aimed to investigate the maturation of the phagolysosome of L. (L.) amazonensis through
the labeling of F-actin and LAMP-1, as well as to determine the role of PI3K on the invasion
process by L. (L.) amazonensis. Murine peritoneal macrophages treated or not with
wortmannin (an inhibitor of the PI3K pathway) were infected with L. (L.) amazonensis
promastigotes. To validate the role of this pathway by this species of Leishmania,
macrophages were transfected with GFP-PLC-δ-PH plasmid, which has homology with
PI(4,5)P2, a component of the PI3K pathway, after which they were infected. Our results
demonstrated that, during the maturation of L. (L.) amazonensis phagosomes, there was
initially F-actin recruitment to the nascent phagosome/endosome, which disappeared after
fusion with lysosomes, as shown by the recruitment of LAMP-1, a lysosomal marker. The
processes of invasion and lysosomal fusion of L. (L.) amazonensis demonstrated a clear
dependency of PI3K activity, as it was demonstrated by the inhibition of these processes by
the PI3K inhibitor wortmannin.
Palavras-chave
Leishmania, Leishmania amazonensis
Citação
GUIMARÃES, Renata Junqueira Rezende. Papel de PI3K na invasão celular e maturação de fagolisossomos de L. (L.) amazonensis. 2009. 62 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2009.