Publicação: Transcriptoma da glândula de peçonha de Crotalus durissus
collilineatus: análise do perfil de expressão gênica
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Resumo
As serpentes da espécie Crotalus durissus são responsáveis pela maioria dos
óbitos envolvendo acidentes ofídicos no Brasil. A subspécie Crotalus durissus
collilineatus está relacionada a um grande número de acidentes nas regiões
Sudeste e Centro-Oeste, porém poucos estudos sobre a composição desta
peçonha têm sido realizados. Com o objetivo de determinar o perfil transcricional
da glândula de peçonha de C. d. collilineatus, foi gerada uma biblioteca parcial de
cDNA, e as seqüências obtidas de clones selecionados ao acaso foram
identificadas por pesquisas de similaridade contra bancos de dados existentes.
Um total de 673 clones foi seqüenciado resultando em 489 seqüências de
qualidade, compreendendo 201 seqüências únicas e 47 redundantes. Das 248
seqüências consenso geradas, 150 (60,5%) apresentaram escores significativos
de alinhamento com seqüências conhecidas. Os resultados demonstraram uma
predominância de ESTs (expressed sequence tags) que codificam toxinas em
relação às seqüências correspondentes à proteínas relacionadas a todas as
funções celulares. A toxina mais freqüente nesta biblioteca consiste na crotoxina,
que compreende 88% das seqüências relacionadas com toxinas. A crotoxina B,
uma fosfolipase A2 (PLA2) básica da crotoxina, apresentou maior variabilidade
quando comparada com a subunidade não enzimática (crotoxina A) desta enzima,
sendo que a maioria das seqüências que codifica esta molécula apresentou
homologia em relação à isoforma CB1 de Crotalus durissus terrificus. 4% das
seqüências identificadas como toxinas neste estudo representam fatores de
crescimento, correspondendo a cinco seqüências de fator de crescimento
endotelial vascular (VEGF) e uma de fator de crescimento neural (NGF), que
apresentou 100% de homologia com NGF de C. d. terrificus. Nós também
identificamos dois clusters para metalloprotease da classe PII, compreendendo
3% do total de toxinas e dois clusters para serinoproteases (2,5% das toxinas). Os
outros 2,5% da biblioteca consistem em singletons codificando seqüências
homologas a carditoxina, convulxina, inibidor de enzima conversora de
angiotensina e peptídeo natriurético tipo-C, Ohanina, crotamina e inibidor de
PLA2. Estes resultados permitiram a identificação da maioria das classes de toxinas comumente encontradas em peçonhas de serpentes, entretanto, algumas
destas eram até então desconhecidas para a peçonha de C. d. collilineatus e até
mesmo para a espécie Crotalus durissus, como, por exemplo, a cardiotoxina e
VEGF.
Abstract
Crotalus durissus rattlesnakes are responsible for the major cases of lethality
involving snakebites in Brazil. Crotalus d. collilineatus subspecie is related to a
great number of accidents in Southeast and Central west regions, but few studies
on its venom composition have been carried out. As an attempt to describe the
transcriptional profile of the C. d. colllineatus venom gland, we generated a cDNA
library and sequences obtained of random selected clones could be identified by
similarity searches on existing databases. A total of 489 out of 673 ESTs produced
readable sequences comprising 201 singletons and 47 clusters of two or more
ESTs. From 248 contiguous sequences, 150 (60.5%) produced significant hits to
known sequences. The results showed a predominance of toxin-coding expressed
sequence tags (ESTs) instead of transcripts coding for proteins involved in all
cellular functions. The most frequent toxin for this library was crotoxin, comprising
88% of toxin-coding sequences. The crotoxin B, a basic phospholipase A2 (PLA2)
subunit of crotoxin, was represented in more variable forms comparing to the nonenzymatic
subunit (crotoxin A), and the most of sequences coding this molecule
were identified as CB1 isoform from Crotalus durissus terrificus venom. 4% of
toxin-related sequences in this study were identified as Growth Factors, comprising five sequences for vascular endothelial growth factor (VEGF) and one
for nerve growth factor (NGF) that showed 100% of identity with C. d. terrificus
NGF. We also identified two clusters for metalloprotease from PII class comprising
3% of toxins, and two for serine proteases, including gyroxin (2.5%). The
remaining 2.5% of toxin-coding ESTs represent singletons identified as homologue
sequences to cardiotoxin, convulxin, angiotensin converting enzyme inhibitor and
C-type natriuretic peptide, Ohanin, crotamin and PLA2 inhibitor. These results
allowed the identifications of the most common classes of snake venom toxins,
however some of them were unknown for C. durissus collilinatus subspecie, and
even for Crotalus durissus specie, such as cardiotoxins and VEGF.
Palavras-chave
Toxinas, Peçonha de serpentes, Transcriptoma, Expressão
gênica, Crotalus durissus collilineatus, Toxins, Snake venom, Transcriptome, Gene expression, Biologia molecular
Citação
FRANÇA, Johara Boldrini. Transcriptoma da glândula de peçonha de Crotalus durissus
collilineatus: análise do perfil de expressão gênica. 2008. 85 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.