Publication: Caracterização parcial de uma ATPase de citosol de encéfalo de rato
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Os resultados deste trabalho mostram a obtenção- de uma fração
enriquecida em atividade ATPásica a partir de citosol de encéfalo de rato O homogeneizado de encéfalos foi centrifugado a 50 000 x g durante 40 minutos e o sobrenadante aplicado a resina de SP-Sepharose. A fração que não interagiu com a resina foi tratada com sulfato de amônio e aplicada a coluna de Q-Sepharose. A fração que não interagiu com esta resina apresentou alta atividade ATPásica; foi tratada com sulfato de amônio 30% e a atividade recuperada por centrifugação. A fração obtida apresentou atividade Mg2t-ATPásica, mas a atividade Ca2‘-ATPásica foi nula. Não foi detectada atividade KVEDTA-ATPásica. Sua atividade Mg--ATPásica foi bem maior que a atividade GTPásica; ADP e PPí não foram substratos. Fluoreto de alumínio mostrou inibição de 30% sobre a53
.. .í
atividade ATPásica. Vanadato e azida não tiveram efeito considerável ; sobre a atividade. Triton X-100 0.2% e alta força iônica inibiram a atividade em torno de 60%. Em SDS-PAGE observou-se a presença de dois polipeptídeos principais de 160 e 54 kDa. A ATPase não interagiu com colunas de troca iônica e sua atividade apresentou propriedades distintas de ATPases conhecidas como Ca2 -ATPase, F^o-ATPase, Na7Kh-ATPase, miosinas, cinesinas e dineínas.
Abstract
This work presents the obtention of rich ATPase-activity fraction from rat encephalon cytosol. The encephalon homogenized was centrifuged 50.000 x g for 40 minutes and the supernatant Ioaded in SP-Sepharose column. The flow through was treated with ammoníum sulfate and Ioaded. i■n Q-Seoenphhaarroossee column. Its flow through was treated with 30 % ammonium sulfat.eo aanndd ATPase activity was resíored by centrifugation.
This fraction showed, MMgn2+-ATPase activity, however, the Ca2+-ATPase activity was zero. N.. o K^/ P/ OTA-ATPase activity was detecíed. The Mg2+- ATPase activity was hu-i flher tfhhaann GuTirPaase activity. Alumminium fluoride inhibited about 3„0„ o/o, AATTPase activity. Azide and vanadate had no effective activity; 0,2 % Triton Xv- 4nn and high salt concentraíion inhibited about 60 % activity. The ScnDqo PAGE analysis showed two evident 160 and 5455
polypeptides. Thís probable ATPase doesrft interact with ionic exchange columns and its activity showed different properties of know ATPases such as Ca2+-ATPase, FiF0-ATPase, Na+/K+-ATPase, myosins, kinesin
and dynein.
Keywords
Proteínas, Adenosinatrifosfatase, Purificação, Inibidores enzimáticos
Citation
PINHEIRO, Carla Mônica. Caracterização parcial de uma ATPase de citosol de encéfalo de rato. 2001. 80 f. Dissertação (Mestrado Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2019. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2001.15
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