Publicação: Avaliação da expressão gênica e proteica da via de sinalização WNT/ Beta-catenina em amostra de carcinoma de células escamosas bucal e sua relação com fatores de prognóstico
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CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
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Coorientador
Faria, Paulo Rogério de
Resumo
O carcinoma de células escamosas bucal (CCEB) no Brasil está situado entre as 10 mais
frequentes neoplasias e entre as 20 maiores causas de morte na população. Na maioria dos
casos o diagnóstico é realizado em estágio avançado e, portanto o paciente apresenta-se com
um prognóstico ruim. Assim, estudos que investigam as proteínas envolvidas em vias de
sinalização intracelular têm sido realizados com o objetivo de se estabelecer futuros
biomarcadores de diagnóstico e prognóstico. A via de sinalização Wnt/β-catenina compõe a
regulação de uma grande variedade de processos fisiológicos em diferentes espécies, com um
papel decisivo no desenvolvimento embrionário, proliferação e diferenciação celular. Sua
participação aparece como candidata natural a ser investigada na carcinogênese e na
progressão do CCEB bucal. Dentre os vários genes relacionados a essa via, está o CTNNB1
sendo a β-catenina o produto gênico da sinalização Wnt/β-catenina mais importante. O
objetivo do estudo foi identificar o padrão de transcrição dos genes (expressão funcional)
GSK3β, APC, CCTBN, c-MYC, CCND1 e CDH1 pertencentes à via de sinalização Wnt/β-
catenina e sua relação com as respectivas proteínas(GSK3β, pGSK3β-Ser9, APC, β-catenina,
c-myc, ciclina D1 e E-caderina) em uma amostra de conveniência tecidual de CCEB, bem
como sua relação com fatores clínico-patológicos considerados possíveis marcadores de sua
progressão e metástase. Os casos de CCEB empregados no estudo foram confirmados
histologicamente e divididos em dois grupos: primários não metastáticos (PNM) e
metastáticos (PM). A expressão gênica foi avaliada por PCR em tempo real. Para estudo
imuno-histoquímico, utilizou-se a técnica de TMA (Tissue Microarray) e o método
estreptavidina-biotina-peroxidase para a revelação das proteínas. A maioria dos pacientes
eram homens, com média de idade a igual a 60 anos, tabagistas e etilistas, diagnosticados em
estágio avançado, com lesões menores que 4 cm, sendo a língua a topografia mais afetada.
Houve maior expressão funcional dos genes investigados no grupo CCEB comparado ao
controle, com p<0,05 para CCND1 e CDH1. Na comparação entre controle, PNM e PM a
expressão funcional de CTNNB1 foi menor no grupo PM comparado ao controle (p<0,05). A
expressão proteica também mostrou-se maior no grupo CCEB comparada ao controle, sendo
esse aumento estatisticamente significante no grupo PM para APC, c-Myc e E-caderina. Não
foram encontradas associações entre as expressões proteicas e fatores clinicipatológicos que
indiquem progressão de doença, tais como, presença de metástase e estágio avançado. Houve
uma correlação positiva entre c-Myc e β-catenina (p<0,0001). Nossos resultados apontam que
a via Wnt/β-catenina parece não estar ativada ou funcionando de forma expressiva nos CCEB
e na progressão tumoral.
Abstract
Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) is one of the 10 most prevalent lesions and the 20th
cause of deaths in Brazil. In most cases the diagnosis is detected in an advanced stage, hence
the patient has a poor prognosis. Thus, studies with proteins that are involved in signaling
pathways have been widely investigated as possible new therapeutic targets to aid the early
diagnosis and prognosis. The Wnt/β-catenin pathway comprises the regulation of a wide
variety of physiological processes in different species, with a decisive role in embryonic
development, cell proliferation and differentiation. Alterations in components of this pathway
have also been reported in neoplasms of the oral cavity and it appears as a natural candidate to
be investigated in oral carcinogenesis and tumor progression of the OSCC. Among the
various related genes investigated in Wnt/ β-catenin pathway there is the CTNNB1 being β-
catenin the most important protein. The aim fo this study was to identify the GSK3β, APC,
CCTBN, c-MYC, CCND1 e CDH1 gene expression and its relation to their respective proteins
(GSK3β, pGSK3β-Ser9, APC, β-catenin, c-myc, cyclin D1 e E-caderin) in a convenience
cohort of OSCC. Associations between clinical and pathological aspects considered possible
progression and metastasis markers were verified. All OSCC diagnoses were histologically
confirmed and categorized in two groups: non-metastasizing (PNM) and metastasizing
primary tumors (PM). For gene expression, it was used the real time PCR approach. For
immunohistochemistry proposal, it was performed a TMA technique and all proteins was
revealed by the streptavidin-biotin peroxidase method. Most patients were male, avarage age
of 60, smokers and drinkers, diagnosed in advanced stage of disease, with lesions measuring
less than 4cm and the tongue being the most affected location. The relative expression of all
investigated genes was higher in the control group, with p<0,05 for CCND1 and CDH1. The
CTNNB1 relative expression decreased in the comparison among the control, PNM and PM
groups, being statistically significant between control and PM groups. The
immunohistochemical results showed increased expression in OSCC in relation to control,
being statistically significant for APC, c-Myc and E-caderin in the PM group. There were not
found any associations between expression of GSK3β, pGSK3β-Ser9, APC, β-catenin, c-myc,
cyclin D1 e E-caderin and clinical and pathological aspects considered possible progression
and metastasis markers. The correlation analysis showed significant positive correlation between
c-Myc and β-catenin (p<0,0001). In conclusion, these results indicate that the Wnt/β-catenin
pathway seems to be inactivated or not been expressed in OSCC and tumor progression.
Palavras-chave
Carcinoma de células escamosas bucal, Oral squamous cell carcinoma, Real time PCR, Imunohistoquímica, Immunohistochemistry, Via de Sinalização Wnt/β-catenina, Wnt/β- catenin Signaling Pathway, Imunologia, Immunology, Boca - Tumores, Mouth - Tumors
Citação
ANDRADE, Marília Ferreira. Avaliação da expressão gênica e proteica da via de sinalização WNT/ Beta-catenina em amostra de carcinoma de células escamosas bucal e sua relação com fatores de prognóstico - Uberlândia. 2016. 91 f. Tese (Doutorado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2016.