Publicação: Purificação e caracterização bioquímica de BthMP: uma nova metaloprotenaise do veneno de Botrops moojeni (Caiçaca)
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
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Resumo
Neste trabalho uma nova metaloproteinase (BthMP) foi purificada do
veneno da serpente Bothrops moojeni. A protease é homogênea em PAGE-SDS
e nativa, apresentou uma única cadeia polipeptídica de 23,5 kDa, pI = 7,1 e Nterminal
bloqueado. BthMP é provida de alta atividade proteolítica sobre a
caseína, fibrina e fibrinogênio bovino; foi inibida por EDTA, EGTA e 1,10-
fenantrolina e manteve sua atividade em pH de 7,0 a 9,0 e temperatura de 5 a
40°C. Ensaios com íons metálicos mostraram que Ca++ é ativador, enquanto Zn++
e Hg++ inibiram cerca de 50 e 80%, respectivamente. BthMP é desprovida de
atividades coagulante, esterásica, fosfolipásica e fracamente hemorrágica quando
comparada ao veneno bruto. O edema induzido pela metaloprotease evidenciou o
importante papel da toxina na atividade inflamatória do veneno. BthMP também
causou incoagulabilidade sanguínea, e provocou alterações histológicas em
músculo gastrocnêmio de camundongos induzindo hemorragia, necrose e
infiltrado leucocitário. A massa molecular e os ensaios de inibição com EDTA e
1,10-fenantrolina sugerem que a metaloproteinase BthMP pertence à classe P-I
das SVMPs.
Abstract
In this work a new metalloproteinase (BthMP) was purified from the snake
venom of Bothrops moojeni. This enzyme was homogeneous by native and SDSPAGE
it showed polypeptide chain of 23,5 kDa, pI = 7,1 and N-terminal blocked.
BthMP is comprised of high proteolytic activity on casein, fibrin and bovine
fibrinogen, but no coagulating, esterase, phospholipase A2 activities, and lightly
hemorrhagic; it was inhibited by EDTA, EGTA and 1,10-phenanthroline and
maintained its activity on pH of 7,0 at 9,0 and temperature of 5 to 40°C. Assays
with metal ions showed that Ca++ is an activator, whereas Zn++ and Hg++
inhibited about 50 and 80%, respectively. The edema evidenced the important role
of the toxin in the inflamatory activity of the venom. BthMP also caused uncloting,
and provoked histological alterations in gastrocnemius muscle of mice inducing
hemorrhage, necrosis and leucocytic infiltrate. The molecular mass and the
inhibition assays suggest that the metalloproteinase BthMP belongs to class P-I
SVMPs.
Palavras-chave
Bothrops moojeni, Metaloproteinases, Veneno, Serpentes, Metalloproteinase, Snake, Venom, Cobra venenosa - Veneno, Bothrops, Proteinase
Citação
GOMES, Mário Sérgio Rocha. Purificação e caracterização bioquímica de BthMP: uma nova metaloprotenaise do veneno de Botrops moojeni (Caiçaca). 2006. 72 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006.