Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21306
Document type: Tese
Access type: Acesso Embargado
Title: Relações filogenéticas de Toxocara spp. e Toxascaris sp. provenientes de diferentes regiões do mundo
Alternate title (s): Phylogenetic relationships of Toxocara spp. and Toxascaris sp. from different regions of the world
Author: Fava, Natália de Melo Nasser
First Advisor: Cury, Márcia Cristina
First coorientator: Nejsum, Peter
First member of the Committee: Lescano, Suzana Angélica Zevallos
Second member of the Committee: Geiger , Stefan Michael
Third member of the Committee: Vieira, Carlos Ueira
Fourth member of the Committee: Miranda, Juliana Silva
Summary: Os nematódeos dos gêneros Toxocara e Toxascaris são identificados, tradicionalmente, com base nos aspectos morfológicos, entretanto a diversidade genética entre esses parasitos é reconhecida, sendo a análise precisa dessa variação é necessária para o entendimento da biologia desses organismos. Esse trabalho teve como objetivos estabelecer relações filogenéticas e filogeográficas entre espécimes de Toxocara canis, Toxocara cati, Toxocara malaysiensis e Toxascaris leonina, e comparar os resultados das técnicas morfológica e moleculares. Foram coletados 436 helmintos adultos e quatro “pools” de ovos de canídeos e felídeos, procedentes de oito países. Os parasitos foram analisados por microscopia estereoscópica, pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e “Restriction Fragment Lenght Polymorfism” (PCR-RFLP). Os primers TOXCOIF3 e TOXCOIF2 foram desenhados para amplificar 490 pares de base do gene mitocrondrial Cox1 e a PCR-RFLP foi realizada utilizando-se a enzima MseI. As relações filogenéticas entre os isolados foram observados no filograma e pelo cálculo das taxas de variabilidade genotípicas (distância filogenética). Dos 313 parasitos adultos provenientes de cães, 309 foram identificados, por microscopia, como T.canis e quatro como T. leonina. Dos 123 oriundos de gatos, 118 foram identificados como T. cati, quatro T. malaysiensis e um T. leonina. Dentre os “pools” de ovos, os três de leoas foram identificados como T. leonina e o de cão como T. canis. A PCR em todas as amostras analisadas (n=440) apresentou falha de 3,6%. Das amostras amplificadas (n=424) 72 foram selecionadas para o sequenciamento. Com exceção de três amostras, duas provenientes de gato foram caracterizadas como T. canis, e uma proveniente de cão como T. cati, todas as restantes foram caracterizadas em concordância com os respectivos hospedeiros. Das 424 amostras submetidas a PCR-RFLP, 351 foram identificadas como T. canis/T.leonina, 70 como T. cati e três como T. malaysiensis. Essa técnica apresentou resultados semelhantes ao sequenciamento. Foram observadas homologia e variação genotípica nas espécies, sendo a maior 6,6%. Relações filogeográficas, dentro das espécies, puderam ser observadas pelo filograma. Entre as técnicas, observou-se 9,7% de incongruência de resultados entre microscopia e sequenciamento e 0,9% entre microscopia e PCR-RFLP. Entre as técnicas moleculares, considerou-se somente T. cati e T. malaysiensis, o que significou 100% de concordância entre resultados. A partir dos achados desse trabalho, conclui-se que alguns isolados, da mesma espécie, apresentaram variabilidade intragenotípica; Sequências homólogas foram identificadas em diferentes países, sugerindo a ocorrência de fluxo gênico; A procedência geográfica teve relação direta com a variação genética dos parasitos; T. canis e T. cati apresentaram taxa de variabilidade semelhante às de T. cati e T. leonina; E as três técnicas utilizadas apresentaram resultados que indicam a preferência de T. canis, T. cati e T. malaysiensis por determinados hospedeiros.
Abstract: The nematodes of the genus Toxocara and Toxascaris are identified, traditionally, based on the morphologic aspects, however the genetic diversity among these parasites is recognized, being an accurate analysis of this variation necessary for the understanding of the biology of these organisms. This work aimed to establish the phylogenetic and phylogeographic relationships among specimens of Toxocara canis, Toxocara cati, Toxocara malaysiensis and Toxascaris leonina and to compare the results given by the morphologic and molecular techniques. In total, 436 helminths adults and four pools of eggs were collected from canids and felines from eight countries. The parasites were analyzed by stereoscopic microscopy, by Polymerase Chain Reaction (PCR) and by Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). Primers TOXCOIF3 and TOXCOIR2 were designed in order to amplify 90pb of the mitochondrial gene Cox1, and the PCR-RFLP using the enzyme MseI could discriminate between these four species. The phylogenetic relationships among the isolates were observed in the phylogram and by the genetic variability (phylogenetic distance) rates. Of the 313 parasites adults, from dogs, 309 were identified, by microscopy, as T. canis and four as T. leonina. Of 123 originating from cats 118 were identified as T. cati, four as T. malaysiensis and one as T. leonina. Among the pools the three from lions were identified as T. leonina and that of dog as T. canis. PCR in all analyzed samples (n=440) failed in 3,6%. Of the amplified samples (n=424) 72 were selected to sequencing. With the exception of three samples, two from cats, were characterized as T. canis and one from dog as T. cati, all remaining were identified in agreement with their respective hosts. Of the 424 samples submitted to PCR-RFLP 351 were identified as T. canis/T.leonina, 70 as T. cati and three as T. malaysiensis. This technique presented similar results to sequencing. Homology and genotypic variation were observed within species, being the largest one 6.6%. Phylogeographic relationships within species could be observed by the phylogram. Among the techniques it was observed 9,7% of incongruence in the results between microscopy and sequencing, and 0,9% between microscopy and PCR-RFLP. Between the molecular techniques, it was considered only T. cati and T. malaysiensis which meant 100% of agreement. Based on the findings, of this study, it was concluded that some isolates of the same specie presented intragenotipic variability; Homologous sequences were identified in different countries, suggesting the occurrence of gene flow; The geographic origin was directed related to the genetic variation of the parasites; T. canis and T. cati presented variability rates similar to T. cati and T. leonina; And the three techniques used, herein, showed results that indicate a preference of T. canis, T. cati and T. malaysiensis for certain hosts.
Keywords: Imunologia
Nematódeos
Microscopia técnica
Toxocara spp
Toxascaris
Relações filogenéticas
Filogeografia
Especificidade de hospedeiro
Microscopia e técnicas morfológicas
Phylogenetic relationships
Host specificity
Molecular techniques
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: FAVA, Natalia de Melo Nasser. Relações filogenéticas de Toxocara spp. e Toxascaris sp. provenientes de diferentes regiões do mundo.Tese (Doutorado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2017.
Document identifier: x
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21306
Date of defense: 28-Jul-2017
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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