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Document type: Tese
Access type: Acesso Embargado
Title: Avaliação de meios de armazenagem e substâncias moduladoras na preservação da viabilidade e inibição clástica
Author: Reis, Manuella Verdinelli de Paula
First Advisor: Soares, Carlos José
First coorientator: Moura, Camilla Christian Gomes
First member of the Committee: Dechichi, Paula
Second member of the Committee: Soares, Priscilla Barbosa Ferreira
Third member of the Committee: Silva, Marcos Vinicius da
Fourth member of the Committee: Oliveira, Maria Angélica Hueb de Menezes
Summary: Estudos têm proposto o uso de diferentes soluções para armazenagem de dentes avulsionados, tais como leite, HBSS, e mais recentemente a água de coco. Contudo, é recomendável que esses meios apresentem capacidade imunomodulatória, a fim de controlar a resposta inflamatória após o reimplante tardio, o que favoreceria melhor prognóstico clínico. Diante disso, o objetivo geral deste estudo foi avaliar o efeito de soluções utilizadas como meios de armazenagem e substâncias com propriedades imunomoduladoras, na preservação da viabilidade celular e inibição da atividade clástica, por meios de experimentos in vitro e in vivo. Este estudo envolveu cinco objetivos específicos. Objetivo 1: avaliar o efeito dos meios de armazenagem na viabilidade de fibroblastos gengivais humanos (FGH) por meio de análise de multiparamétrica da citotoxicidade; e, seus efeitos na superfície externa da dentina radicular bovina por meio de análise com FTIR. Objetivo 2: avaliar histomorfometricamente o processo de reparo do periodonto de dentes de cães reimplantados após armazenagem em duas formulações diferentes de água de coco liofilizada. Objetivo 3: avaliar o efeito da lectina (ScLL), na viabilidade, proliferação e liberação de IL-10 em FGH estimulados com LPS. Objetivo 4: avaliar o efeito de 15d-PGJ2 e ScLL em FGH estimulados com LPS quanto a viabilidade, liberação de IL-6 e TGFβ-1. Objetivo 5: avaliar a viabilidade de células periféricas mononucleares de sangue humano estimuladas com LPS e em macrófagos murinos RAW 264.7 tratados com ScLL, bem como seus efeitos na osteoclastogênese in vitro, e na liberação de TNF-α e NO. Frente aos resultados destes objetivos conclui-se que: 1) o leite de soja apresentou maior viabilidade quando comparado aos meios HBSS e leite integral, enquanto que na composição da dentina todos os meios apresentaram comportamento similar. E, do ponto de vista clínico o tempo de armazenagem de até 1h mostrou ser fator crucial para o prognóstico de dentes reimplantados; 2) Em relação à água de coco liofilizada, a formulação ACP-404 I foi capaz de preservar o LP e limitar os níveis de reabsorção superficial; 3) As concentrações testadas de ScLL em cultura de fibroblastos não apresentaram citotoxicidade, e não gerou efeito negativo nos parâmetros proliferação celular e liberação de IL-10; 4) A concentração de ScLL 5 μg/ml não interferiu na viabilidade celular. Em relação ao parâmetro liberação de IL-6, ScLL 2 μg/ml e 15d-PGJ2 1 μg/ml demonstrou menores níveis desta citocina inflamatória, e todas as substâncias testadas não tiveram efeito na liberação de TGFβ-1; 6) E por fim, ScLL na concentração de 5 μg/ml suprimiu a osteoclastogênese in vitro, sem interferir na viabilidade de células periféricas de sangue humano e precursoras de osteoclastos murinos, e não apresentou efeito na liberação de TNF-α e NO. Portanto, este estudo foi o primeiro passo para avaliar o uso de ScLL como agente imunomodulatório para prevenir a reabsorção em dentes avulsionados, e futuramente sua associação com a água de coco liofilizada, pode gerar perspectivas de inovação tecnológica e transferência de tecnologia com geração de novos produtos para dentes avulsionados.
Abstract: Studies have proposed the use of different solutions for storage of avulsed teeth, such as milk, HBSS, and recently the coconut water. However, it would be interesting the association of these storage media with some immunomodulatory substance that be able to control the inflammatory response after late replantation, and improve the prognosis in such cases. Thus, the general objective of the present study was to evaluate the effect of storage media and modulatory substances on preservation viability and inhibit the osteoclast activity, by in vitro and in vivo studies. This study involved five specific objectives: Objective 1: evaluate the effect of storage media on viability of human gingival fibroblasts (HGF) by multiparametric cytotoxic assay; and, on the extern superficial of bovine root dentine by FTIR analysis. Objective 2: evaluate the the periodontal healing process quantitatively and qualitatively of dog teeth replanted after storage in two different formulations of powdered coconut water by histomorphometric analysis. Objective 3: evaluate the effect of lectin (ScLL), stimulated with LPS, on the viability, proliferation and release of IL-10 in HGF Objective 4: evaluate the effect of 15d-PGJ2 and ScLL in HGF LPS-stimulated on viability, and release of IL-6 and TGFβ-1. Objective 5: evaluate the viability of ScLL in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated with LPS and in murine macrophage RAW 264.7, as well as their effects on the osteoclastogenesis in vitro, and on the release of TNF-α and NO. Based on the results of these objectives is possible to conclude that: 1) the soy milk presented higher viability when compared with HBSS and whole milk, whereas the solutions behaved similarly on the dentine composition. Clinically the time at 1 h is a crucial factor in the prognosis of dental replantation; 2) In relation the powdered coconut water, ACP-404 I formulation was able to preserve the normal periodontium and limit the level of surface resorption. Additionally, this study demonstrated that the adjustment of the pH of coconut water is essential to maintain the normal periodontium; 3) The ScLL concentrations tested as possible immunomodulator agent were not cytotoxic, and had not effect on the cell proliferation and release of IL-10 parameters; 4) In the others analysis assay, the concentration of ScLL 5 μg/ml did not interfere in the cell viability. In relation to release of IL-6 parameter, ScLL 2 μg/ml and 15d-PGJ2 1 μg/ml demonstrated the lowest levels of this inflammatory cytokine, and all the tested substances had no effect on the release of TGFβ-1; 5) Finally, ScLL in the concentration 5 μg/ml supressed the in vitro osteoclastogenesis, without interfering in the PBMC and murine osteoclast precursors viability, and no presented effect on the release of TNF-α and NO. Therefore, it is the first step to evaluate the use of ScLL as immunomodulatory agent to prevent the resorption in avulsed teeth, and in the future their association with the powdered coconut water, which may open up new perspectives innovation and transferring of technology with the generation of the new products for treating avulsed teeth.
Keywords: Odontologia
Periodontia
Reabsorção da raiz (Dentes)
Dentes - Reimplante
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::ODONTOLOGIA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Odontologia
Quote: REIS, Manuella Verdinelli de Paula. Avaliação de meios de armazenagem e substâncias moduladoras na preservação da viabilidade e inibição clástica. 2017. 90 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2017. Disponível em http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2017.50.
Document identifier: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2017.50
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/18955
Date of defense: 20-Feb-2017
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